[發明專利]一種玫瑰石斛組織培養擴繁的方法

在審

• 申請號: 201711449365.2
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108157176A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 許冬瑾;嚴新;雷連海;杜永魏
• 申請（專利權）人: 康美藥業（文山）藥材種植管理有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/08
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 邵穗娟;湯喜友

1.一種玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于包括：

外植體選擇步驟：選擇玫瑰石斛母本植株，對其人工授粉，讓其長出果莢，繼續培育，待果莢成熟后，將其采摘保存；

外植體消毒步驟：取出果莢放入培養瓶中，先潔凈果莢，然后對果莢外殼進行一次消毒1-2min，然后用無菌水沖洗3-4次，再進行二次消毒6-8min，然后用無菌水沖洗4-5次，備用；

播種步驟：將消毒后的果莢解剖開露出黃色果粉，將果粉撒到第一1/2MS培養基上，封上培養瓶的瓶蓋，培養至種子萌發；

繼代培養步驟：萌發的玫瑰石斛種子繼續培養，玫瑰石斛種苗長到2-3cm高時稱之為一級母瓶，此時將一級母瓶在無菌操作臺上轉到第二1/2MS培養基中，長至5-6cm時稱為二級母瓶；

生根培養步驟：將二級母瓶轉至MS培養基中，生根培養得到生根瓶苗；

煉苗、馴化移栽步驟：將生根瓶苗培養85-95天，再將其移到避免強光直射的室外環境中，放置15-30天，再打開培養瓶的瓶蓋放置3-5天后，用多菌靈稀釋液浸泡玫瑰石斛苗根部，洗凈陰干水分，將其移栽到基質中馴化。

2.如權利要求1所述的玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于：外植體選擇步驟中，選擇玫瑰石斛2-4年的母本植株，在玫瑰石斛開花期間對其人工授粉，讓其長出果莢，繼續培育3-4個月，待果莢成熟后，將其采摘放置在3-7℃的環境下保存1-3周。

3.如權利要求1所述的玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于：外植體消毒步驟中，潔凈果莢的具體步驟為，先將果莢用洗潔精水浸泡15-20min，用毛刷刷凈種殼表面，并用自來水沖洗10-15min，然后將果莢用濃度75％醫用酒精浸泡30-60s，無菌水沖洗3-4次，再進行消毒；用濃度為1-3％的次氯酸鈉進行一次消毒，用濃度為0.1-0.3％的氯化汞進行二次消毒。

4.如權利要求1所述的玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于：播種步驟中，第一1/2MS培養基的成分包括1890-1900mg/L硝酸鉀，1640-1650mg/L硝酸銨，440-445mg/L二水氯化鈣，370-375mg/L七水硫酸鎂，160-170mg/L磷酸二氫鉀，0.8-0.83mg/L碘化鉀，6.0-6.2mg/L硼酸，22.3-23.0mg/L四水硫酸錳，8.6-9.0mg/L七水硫酸鋅，0.2-0.25mg/L鉬酸鈉，0.025-0.028mg/L五水硫酸銅，0.028-0.03mg/L氯化鈷，27.5-29mg/L硫酸亞鐵，23-25mg/L乙二胺四乙酸，96-100mg/L肌醇，0.2-0.3mg/L煙酸，0.25-0.35mg/L鹽酸硫胺素，0.2-0.3mg/L鹽酸吡哆鋅，0.8-0.9mg/L甘氨酸，濃度為2％-3％的蔗糖和4.8-6.0g/L瓊脂粉，pH調至5.8-6.2。

5.如權利要求1所述的玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于：播種步驟中，培養25-30天至種子萌發，培養的條件為，溫度為24℃-26℃，光照強度為2000-2500lx，光照時間為10-12小時/天。

6.如權利要求1所述的玫瑰石斛組織培養擴繁的方法，其特征在于：繼代培養具體為，萌發的玫瑰石斛種子置于光照強度為2000-2500lx的培養室中繼續培養40-50天，光照時間為10-12小時/天，玫瑰石斛種苗長到2-3cm高時稱之為一級母瓶，此時將一級母瓶在無菌操作臺上轉到第二1/2MS培養基中，培養55-65天，長至5-6cm時稱為二級母瓶。