[發明專利]一種紫苑石斛的組織培養育苗方法

在審

• 申請號: 201711449336.6
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108157174A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 許冬瑾;嚴新;雷連海;杜永魏
• 申請（專利權）人: 康美藥業（文山）藥材種植管理有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/08
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 邵穗娟;湯喜友

1.一種紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，包括：

外植體選擇步驟：在紫苑石斛母本植株的開花期進行人工授粉，長出果莢后，繼續培育，采摘成熟果莢并置于冰箱中保存，得到備用果莢；

果莢消毒步驟：取所述備用果莢，將種殼表面清洗干凈，得到第一潔凈果莢；將所述第一潔凈果莢移至接種室中，進行酒精消毒和無菌水沖洗，得到第二潔凈果莢；將所述第二潔凈果莢用次氯酸鈉消毒和無菌水沖洗，得到第三潔凈果莢；將所述第三潔凈果莢用升汞消毒和無菌水沖洗，得到第四潔凈果莢；

播種步驟：解剖所述第四潔凈果莢，將果粉撒到1/2MS培養基上，轉移至培養室中培養，得到萌芽種子；

繼代培養步驟：將所述萌芽種子置于培養室中繼續培養，直至種苗長到2-3cm，獲取一級瓶苗；將所述一級瓶苗轉移至1/2MS培養基中，生長至5-6cm時，獲取二級瓶苗；

生根培養步驟：將所述二級瓶苗轉移至生根培養基中進行培養，獲取生根瓶苗；

煉苗馴化步驟：將所述生根瓶苗置于培養室中培養，然后移到室外環境中進行馴化，獲取馴化苗；

移栽步驟：將所述生根培養基的瓶蓋打開，繼續放置所述馴化苗3-5天，然后倒出，并用多菌靈浸泡苗根部，接著洗凈陰干，移栽至基質中進行馴化。

2.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述外植體選擇步驟中，紫苑石斛母本植株的植株年齡為2-4年；長出果莢后繼續培育3-4個月；將所述成熟果莢置于3-7℃的冰箱中保存1.5-2.5周。

3.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述果莢消毒步驟中，將所述備用果莢用洗潔精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷干凈種殼表面，并用自來水沖洗10-15min，得到第一潔凈果莢；將所述第一潔凈果莢放至潔凈燒杯中，移至接種室，在無菌操作臺上用75％醫用酒精浸泡30-60s，浸泡期間用鑷子不斷攪拌，保證消毒徹底，接著用無菌水沖洗3-4次，得到第二潔凈果莢；將所述第二潔凈果莢用濃度為2％的次氯酸鈉消毒外殼1-2min，接著用無菌水沖洗3-4次，得到第三潔凈果莢；將所述第三潔凈果莢用0.1％的升汞消毒6-8min，接著用無菌水沖洗4-5次，得到第四潔凈果莢。

4.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述播種步驟中，用經過280-290℃高溫消毒的解剖刀和鑷子解剖所述第四潔凈果莢，將果粉撒到1/2MS培養基后，并蓋上經過消毒的培養基瓶蓋；所述培養室的溫度為24-26℃，光照強度為2000-2500Lx，光照時間為10-12小時/天，培養30-35天。

5.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述播種步驟中，在所述1/2MS培養基中添加2％的蔗糖、4.8g/L的瓊脂粉，并將培養基的pH調至5.8-6.0。

6.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述繼代培養步驟中，將所述萌芽種子置于光照強度為2000-2500Lx的培養室中繼續培養，光照時間為10-12小時/天，生長50-60天，直至種苗長到2-3cm，獲取一級瓶苗；在無菌環境下將所述一級瓶苗轉移至1/2MS培養基中培養50-60天，生長至5-6cm時，獲取二級瓶苗。

7.如權利要求1所述的紫苑石斛的組織培養育苗方法，其特征在于，在所述繼代培養步驟中，在所述1/2MS培養基中添加0.8mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6芐基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的瓊脂粉、35g/L的土豆汁和0.3g/L的活性碳粉，并將培養基的pH調至5.8-6.0。