[發明專利]一種人源單鏈抗體及其應用

有效

• 申請號: 201711449190.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108059679B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 李桂英;趙良中;郜瑞娟;趙佳亮;劉子鈺;琚常青
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C07K19/00;C12N15/13;C12N15/62;A61K39/395;A61P1/16;A61P9/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉偉;趙青朵

本發明屬于抗體藥物領域公開了利用噬菌體抗體庫技術篩選并利用基因工程方法制備的人源單鏈抗體即抗PHD2的人源單鏈抗體INP及抗PHD2的人源胞內單鏈抗體ER?INP，并公開了編碼所述人源單鏈抗體的多核苷酸、包含所述多核苷酸的載體及用途。本發明所述人源單鏈抗體INP及ER?INP是一種低毒、高效、特異的抑制PHD2羥化活性的活性分子，避免了異源抗體用于人體的毒副作用。同時該人源單鏈抗體是小分子的單鏈抗體，具有分子量小、免疫原性低等優點。另外，引入內質網定位信號使人源胞內單鏈抗體ER?INP在細胞內高效、穩定的抑制PHD2的羥化活性，可有效提高HIF的蛋白水平，促進血管生成和肝等組織損傷修復，對組織損傷起保護作用。

技術領域

本發明屬于抗體藥物領域，具體涉及一種人源單鏈抗體及其應用。

背景技術

氧氣的動態平衡在機體的生理和發育過程中扮演著重要角色，隨著環境中氧氣濃度的變化，機體也會做出應答來適應缺氧。在缺氧條件下，缺氧誘導因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)作為缺氧應激最主要的因子，能夠驅動一系列基因的轉錄，促進缺氧適應性反應。HIF-1最初是在1992年由Semenza G L等對經缺氧處理的Hep3B和HepG2細胞株的核提取物進行凝膠遷移分析時被發現的，而且實驗表明HIF-1介導了缺氧誘導的促紅細胞生成素(EPO)基因的轉錄。HIF-1是急性低氧應激最敏感的因子，也是機體缺氧應答的主要轉錄因子，目前的研究表明其下游靶基因有1000多種，這些基因大部分在急性或慢性缺氧適應性反應中都有重要作用，如調節紅細胞和新血管的生成，調節細胞的代謝，調節細胞的生存力、增殖和凋亡等。在急性肝損傷中，HIF-1的上調是促進血管生成和組織損傷修復的關鍵。1995年Wang G.L.(J.Biol.Chem,1995,270(3):1230-1237)提出HIF是一種異二聚體，它是由HIF-α和HIF-β兩個亞基組成的，其穩定性取決于HIF-1α亞基。1999年Maxwell,P.H.(Nature(London)1999,399：271–275)提出腫瘤抑制蛋白pVHL(product ofvon Hippe-llindau)靶向HIF-α的氧依賴蛋白水解過程，是調節HIF-α穩定性的關鍵物質。2001年Ivan,M.(Science 292,2001 464–468)提出在常氧狀態下，脯氨酸羥化酶(PHD)能夠羥化HIF-α的兩個脯氨酸殘基，被羥基化的HIF-α與VHL結合，招募E3泛素連接酶，通過泛素介導的蛋白酶體降解途徑促進HIF-α的降解。2006年Tian YM(Biochem J,2006,397(1):1792186.)提出常氧狀態下HIF-α通過pVHL介導的泛素-蛋白酶體途徑降解，HIF-α的特定脯氨酰殘基(H IF-1α的Pro-402和Pro-564)羥基化是pVHL與其結合的必要條件，二者的結合啟動了HIF-α的降解過程。由此可見，HIF-α脯氨酰殘基的羥基化是HIF降解的關鍵，而脯氨酸羥化酶(PHD)便是該催化反應的限速酶。