[發明專利]一種冰凍切片固定液套劑及固定方法

在審

• 申請號: 201711447316.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108168990A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 蘇華;朱紅艷;張春
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 李強

本發明涉及一種冰凍切片固定液套劑，其包括A液和B液，所述A液由10％甲醛、95％酒精和冰醋酸配制而成，所述B液由無水酒精和冰醋酸配制而成。還涉及一種固定冰凍切片的方法，包括使用上述冰凍切片固定液套劑固定冰凍切片的步驟。本發明的固定液套劑和固定方法能夠快速固定組織、形態保存良好、染色鮮艷。尤其適于腎組織切片，在普通光鏡下，腎小球、腎小管?間質及腎血管結構的清晰度、細胞形態、胞核與胞質染色效果與石蠟切片高度相似。

技術領域

本發明涉及組織染色技術領域，更特別地，涉及一種冰凍切片固定液套 劑及固定方法。

背景技術

移植前供腎活檢，主要用于擴展指標的供體(expanded criteria donor， ECD)腎臟。ECD供腎質量與移植腎的長期預后直接相關，快速進行ECD供腎 組織形態學評估一方面為移植腎長期存活提供基礎保障，并可減少腎臟冷缺 血時間與腎功能恢復的延遲；另一方面也對移植術后的狀況與治療具有預測 與指導意義。

石蠟切片雖對組織形態保存完好，但其耗時長，并且石蠟切片制備過程 中有可能發生抗原丟失，因此常常采用冰凍切片染色來評估ECD供腎。冰凍 切片染色分析是快速評估供腎組織形態學的關鍵技術，其制備過程的長短及 切片質量直接影響供腎評估工作的效能。常規的冰凍切片制備雖耗時短，但 組織形態基本被破壞，不利于觀察。

主要問題出在固定液上，冰凍組織的固定液種類較多，常用的有乙醇、 甲醛、AAF液等。乙醇具有較好的脫水與收縮作用，但因能沉淀核蛋白而導 致核著色不良。甲醛穿透力較強，對組織無明顯收縮和膨脹作用，故無法消 除因冷凍引起的細胞腫脹，再者其可與蛋白質交聯，經其固定后的細胞器體 積明顯縮小，最后中性甲醛亦干擾酸性染料著色。AAF是一種改良的復合型 固定液，對乳腺、胃腸道等組織有良好的固定作用，但由于其所含成分苦味 酸對細胞器的破壞較大，因而不適合固定富含細胞器的腎組織。除了對組織 形態的影響外，大多數冰凍組織固定液需要幾分鐘至十幾分鐘的固定時間， 如果縮短固定時間，則達不到診斷要求。

發明內容

我們針對冰凍切片固定液以及固定方法進行了改良，以求最大限度地保 持組織形態和縮短標本制備時間。

基于以上工作，我們提供了一種冰凍切片固定液套劑，其包括A液和B 液，所述A液由10％甲醛、95％酒精和冰醋酸配制而成，所述B液由無水酒精 和冰醋酸配制而成。

在一個優選實施方案中，所述A液中10％甲醛、95％酒精和冰醋酸的體積 比為0.7-0.9:0.17-0.21:0.008-0.012，所述B液中無水酒精和冰醋酸的體 積比為0.75:0.25。

在一個優選實施方案中，所述A液中10％甲醛、95％酒精和冰醋酸的體積 比為0.8:0.19:0.01，所述B液中無水酒精和冰醋酸的體積比為0.75:0.25。

本發明還提供了一種固定冰凍切片的方法，包括使用上述冰凍切片固定 液套劑固定冰凍切片的步驟。

在一個具體實施方案中，所述方法包括以下步驟：

S1：將冰凍切片于所述A液中孵育；

S2：將在所述A液中孵育過的冰凍切片立即放入所述B液中孵育，孵育 后即得到固定好的冰凍切片。

在一個優選實施方案中，S1中所述A液的孵育時間為15s。

在一個優選實施方案中，S2中所述B液的孵育時間為15s。

在一個優選實施方案中，所述固定在20-25℃下進行。

甲醛組織穿透力強，固定效果好，但需要較長的固定時間，并且它不能 抵消因冰凍所致的細胞腫脹；95％乙醇滲透力強，但對組織有明顯的收縮作 用，導致固定不均勻；冰醋酸可迅速穿透組織，起效快且固定效果均勻，但 可致膠原纖維腫脹，不能單獨使用。