[發明專利]一種高濃縮生長因子的應用

在審

• 申請號: 201711443840.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108096053A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 王玥;劉美莉
• 申請（專利權）人: 保信亞太生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: A61K8/64
• 分類號: A61K8/64;A61K8/98;A61K8/99;A61Q19/02;A61Q19/08;A61Q19/00;A61K38/18;A61K35/28;A61K35/16;A61P17/02
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 邢江峰

1.一種高濃縮生長因子及其應用，包括高濃度血小板血漿和脂肪干細胞來源，其特征在于，包括以下步驟：

1)高濃度血小板血漿提取生長因子的步驟如下：

(A)通過靜脈抽血或者其他方法從自體身上取出30-60ml體積的血液，放置在檸檬酸鈉血液收集管中或其他便于運輸的容器內，使血液和抗凝劑充分混勻；

(B)使混有抗凝劑的血液置于離心管中，進行第一次離心，采用300g的離心速度，時間為5min，使血液基本上分成三層；

(C)然后將收集的血漿同白細胞層混合均勻，進行第二次離心，采用700g的離心速度，時間為17min；

(D)棄掉離心管80％左右的上層血漿，利用剩余的血漿使沉淀的血小板重新懸浮，收集到容器中即得血小板血漿，而生長因子就高度富集于分離好的高濃度血小板血漿中；

(E)從穩定的高濃度血小板血漿中釋放生長因子，采取虹吸法過濾釋放的生長因子；

(F)將已釋放的生長因子保存在-80℃的冷藏環境中；

其中步驟(D)中，步驟(D)所得血小板血漿中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的8～10倍。

2)脂肪干細胞來源提取生長因子的步驟如下：

(A)通過抽脂或微創手術抽取60-200ml體積的脂肪，加入運輸液送到實驗室；

(B)脂肪間質血管層(SVF)將通過2-3次預熱的等體積(乳酸鈉溶液：脂肪組織＝1：1)的乳酸鈉溶液清洗(第一次用含有2％抗生素濃度的乳酸鈉溶液清洗，第2-3次用純凈的乳酸鈉溶液清洗)后獲得；

用預熱的含有2％抗生素的等體積乳酸鈉溶液清洗抽取的脂肪組織，大力地用手晃動(或用600振幅/分鐘的振動篩)含有脂肪組織及清洗液的容器1-2分鐘后，將懸浮的混合物靜止10分鐘或用300g的速度離心5分鐘，然后棄掉乳酸鈉溶液層；再使用純凈的乳酸鈉溶液清洗脂肪組織1-2次，盡可能的吸掉殘留的紅細胞，最終都棄掉清洗液保留脂肪組織層；在清洗過的脂肪組織中加入等體積的濃度為1mg/ml的膠原酶溶液在37度、180RPM的振動篩上消化分解60分鐘；將消化好的脂肪組織以600-800g的速度離心10分鐘，消化后的脂肪組織將被分為三層：油質/脂肪細胞層，清夜層以及最下層沉淀；

(C)向所述脂肪干細胞來源施加選自低氧培養、UV照射、營養缺乏和機械摩擦中的至少一種物理刺激，穩定高濃度血小板血漿內的生物結構；

(D)從穩定后的脂肪間質血管層(SVF)中釋放生長因子，用100μm的過濾篩過濾掉組織碎片；

(E)將已釋放的生長因子保存在-80℃的冷藏環境中。

對現有產品的進一步研發中，釋放生長因子這一過程將通過反復凍融這一過程來完成，高濃度血小板血漿或脂肪間質血管層在零下55攝氏度的環境下至少冷凍30分鐘，然后在37攝氏度的條件下復融10分鐘，釋放的生長因子通過醋酸纖維素薄膜過濾后儲存在零下80攝氏度的環境中，通過這一操作過程，高濃縮生長因子將可以保存長至幾年的時間。

2.根據權利要求1中所述的一種高濃縮生長因子，其特征在于：所述高濃度血小板血漿和脂肪間質血管層皆從自體中所獲得。

3.根據權利要求1中所述的一種高濃縮生長因子，其特征在于：所述高濃度血小板血漿和脂肪間質血管層反復凍融的操作步驟，高濃度血小板血漿和脂肪間質血管層在零下55攝氏度的環境中冷凍30分鐘，在復融過程中，高濃度血小板血漿和脂肪間質血管層在零上37攝氏度的環境中復融10分鐘。

4.根據權利要求1中1)所述的一種高濃縮生長因子，其特征在于：所述抗凝劑選自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣鈉、枸櫞酸葡萄糖或其組合。

5.根據權利要求1中所述的一種高濃縮生長因子，其特征在于：在過濾過程中，使用乙酸纖維素薄膜過濾釋放的生長因子。

6.根據權利要求1中2)所述的一種高濃縮生長因子，其特征在于：所述低氧培養在6％碳和1％～6％氧的條件下進行，所述UV照射是通過用具有波長為260nm～300nm的UV光以60mJ～100mJ的能量劑量照射而進行的。