[發(fā)明專利]一種抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y的靶點(diǎn)及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711443032.9
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN108096580B
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝勇;趙京鳳;趙曉宏;成鐘;王楠;蔡大勇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號(hào): A61K45/00
• 分類號(hào): A61K45/00;A61K39/395;A61K31/7088;A61P35/00;C12Q1/02
• 代理公司: 太原晉科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 鄭晉周

本發(fā)明屬生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供一種抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH?SY5Y的靶點(diǎn)，ARL8A基因和/或其參與的自噬途徑。ARL8A基因和/或其參與的自噬途徑的抑制劑包括：抗ARL8A的抗體、針對ARL8A編碼序列的RNA干擾分子或反義寡核苷酸、ARL8A介導(dǎo)的自噬途徑抑制劑。RNA干擾分子為定向干擾SH?SY5Y細(xì)胞中ARL8A基因表達(dá)的siRNA分子，為ARL8A?homo?698。特異性的降解ARL8A基因的mRNA，干擾轉(zhuǎn)錄后翻譯過程，誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡，達(dá)到抑制腫瘤的作用。對開發(fā)新的抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤藥物具有重要指導(dǎo)作用，用于開發(fā)制備抗腫瘤藥物，對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療有重大應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y的靶點(diǎn)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

Gie2又稱 ARL8A (ADP-ribosylation factor like protein 8A)或ARL10B(ADP-ribosylation factor like protein 10B)是與溶酶體結(jié)合來調(diào)控細(xì)胞自噬的小G蛋白，和另一個(gè)小G蛋白Gie1 又稱ARL8B (ADP-ribosylation factor like protein 8B) 或ARL10C （ADP-ribosylation factor like protein 10C)的結(jié)構(gòu)高度相似。以下采用ARL8A和ARL10B分別命名這兩個(gè)蛋白質(zhì)。正常生理?xiàng)l件下，在全身各器官內(nèi)這兩個(gè)蛋白都有表達(dá)，在已知的大多數(shù)腫瘤細(xì)胞內(nèi)這兩個(gè)蛋白質(zhì)也都有表達(dá)。2011年《Nature Cell Biology》雜志報(bào)道了Hela細(xì)胞內(nèi)ARL8A和ARL8B的功能，當(dāng)細(xì)胞處于營養(yǎng)充足的環(huán)境中，二者呈現(xiàn)一定的表達(dá)水平，對應(yīng)的細(xì)胞狀態(tài)為低自噬狀態(tài)，與自噬相關(guān)的溶酶體處于細(xì)胞外周。當(dāng)Hela細(xì)胞處于營養(yǎng)缺乏的培養(yǎng)環(huán)境中，二者的表達(dá)量顯著降低，細(xì)胞處于高自噬水平，此時(shí)溶酶體處于細(xì)胞中央發(fā)揮自噬。這篇文獻(xiàn)證明了ARL8A和ARL8B是Hela細(xì)胞處于抵抗饑餓誘導(dǎo)自噬過程中調(diào)控溶酶體遷移的關(guān)鍵酶，二者的功能相同。2016年《Oncotarget》雜志報(bào)道在前列腺癌細(xì)胞內(nèi)ARLA幾乎無表達(dá)，可認(rèn)為是ARL8B單獨(dú)表達(dá)型，降低ARLB表達(dá)量會(huì)促進(jìn)大鼠前列腺癌細(xì)胞凋亡，證明是一個(gè)抗腫瘤藥物靶點(diǎn)。從已知的ARLA和ARLB的研究成果來看，ARL8A也可能抗腫瘤藥物作用靶點(diǎn)。依據(jù)ARL8A和ARL8B的表達(dá)量差異，腫瘤細(xì)胞可以分為ARL8B單獨(dú)（或優(yōu)勢）表達(dá)型、ARL8A單獨(dú)（或優(yōu)勢）表達(dá)型、二者共有型等三種。迄今為止尚無ARL8A單獨(dú)表達(dá)（或優(yōu)勢）表達(dá)型的細(xì)胞報(bào)導(dǎo)。

神經(jīng)母細(xì)胞瘤是人體神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，尤以在嬰幼兒中多發(fā)，發(fā)病率和病死率較高，預(yù)后不良，目前對于神經(jīng)母細(xì)胞瘤的病因和發(fā)病機(jī)制尚未明確。人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SH-SY5Y是來源于1970年建立的一神經(jīng)母細(xì)胞瘤株患者的轉(zhuǎn)移骨瘤灶細(xì)胞SK-N-SH經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性，與正常多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞在功能上相似，因此廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變(如PD)的發(fā)病機(jī)制和防治措施的研究。SH-SY5Y細(xì)胞中含有凋亡相關(guān)酪氨酸激酶，在調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分化，并且能增強(qiáng)其他誘導(dǎo)分化物的作用。如果降低SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)量，能導(dǎo)致SH-SY5Y凋亡，所采用的相關(guān)原材料和實(shí)驗(yàn)方法對抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤的新藥研發(fā)將有很好啟迪或促進(jìn)作用。

RNA干擾(RNAi)是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。由于使用RNAi技術(shù)可以特異性干擾特定基因的表達(dá)，所以該技術(shù)被廣泛用于探索基因功能及腫瘤基因的治療領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供了一種抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y的靶點(diǎn)，所述靶點(diǎn)為ARL8A基因和/或其參與的自噬途徑。

本發(fā)明的另一目的是提供了一種ARL8A基因和/或其參與的自噬途徑的抑制劑在降低和/或消除神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y藥物中的應(yīng)用。