[發明專利]一株抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 201711442565.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108456661A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 匡華;王忠興;胥傳來;徐麗廣;馬偉;吳曉玲;劉麗強;朱建平;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一株抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫學檢測技術領域。本發明的抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14693。抗苯并芘特異性單克隆抗體，由所述保藏編號為CGMCC No.14693的雜交瘤細胞株所分泌產生。此細胞株分泌的單克隆抗體，對苯并芘具有較好的特異性(IC₅₀值22μg/L)，可以用于食品安全中苯并芘的特異性檢測。

技術領域

本發明涉及一株抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫學檢測技術領域。

背景技術

苯并芘(Benzopyrene，BAP)是一種含有5個苯環的稠環芳烴，是強致癌物之一，其化學式為C₂₀O₁₂，分子量約252.32，苯并芘化學性質大多情況下較穩定，遇明火及受高熱時可分解并放出有毒的氣體。其在環境中廣泛存在，工業生產和生活過程中煤炭、石油和天然氣等燃料不完全燃燒產生的廢氣以及食物在熏制、烘烤和煎炸等高溫烹調過程中都會產生。

由于苯并芘來源廣泛，其危害性又比較大，目前國內外對苯并芘檢測的研究多集中于大氣、水體等環境及糧油、肉類等食品中，由于檢測對象的不同，富集、提取的方法也不同，因此分析和檢測所采取的方法也各不相同。目前苯并芘檢測多采用高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜與質譜聯用法(LC-MS)、氣質聯用法(GC-MS)等。上述檢測方法可進行定量分析并具有較低的檢測限，但是通常需要昂貴的儀器和復雜的操作，前處理及檢測時間長，嚴重制約了這些檢測方法的推廣，無法達到現場大批量快速檢測的要求。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高靈敏、對技術人員相對要求低等特點，因此適用于大量樣品的快速篩查。本發明的目的在于提供一種對苯并芘具有較高親和力和檢測靈敏度的單克隆抗體雜交瘤細胞株的制備方法，為間接競爭ELISA試劑盒以及膠體金試紙條的研發推廣奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株，由該細胞株制備的抗體對苯并芘具有較好的親和力和檢測靈敏度，可以用來建立苯并芘酶聯免疫檢測方法，或建立膠體金免疫層析技術快速檢測方法。

本發明的第一個目的是提供一株抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株，已于2017年9 月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No.14693。

本發明的第二個目的是提供一種檢測檢測苯并芘的方法，所述方法是利用權利要求1所述的單克隆細胞株分泌產生的抗苯并芘特異性單克隆抗體。

本發明的第三個目的是提供一種抗苯并芘特異性單克隆抗體，所述單克隆抗體由所述保藏編號為CGMCC No.14693的抗苯并芘特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌產生。

本發明的第四個目的是提供上述的抗苯并芘特異性單克隆抗體的應用，用于食品安全檢測中苯并芘殘留的分析檢測。

本發明的第五個目的是提供一種試劑盒，其所述試劑盒含有所述的單克隆細胞株或者所述的抗苯并芘特異性單克隆抗體。

在本發明的一種實施方式中，所述試劑盒用于檢測苯并芘。

本發明的第六個目的是提供所述的試劑盒在檢測苯并芘中的應用。

本發明提供的細胞株的制備基本步驟為：

(1)免疫原的制備與鑒定：以帶有羧基的苯并芘衍生物為起始反應物，通過碳化二亞胺法與蛋白載體相連，之后通過透析分離完全抗原和未偶聯的小分子半抗原，完全抗原通過紫外吸收掃描方法鑒定；