[發明專利]一種馬鈴薯GATA轉錄因子及其克隆方法與應用

有效

• 申請號: 201711441863.2
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN107937415B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 甘曉燕;宋玉霞;鞏檑;張麗;陳虞超;石磊;聶峰杰;劉璇
• 申請（專利權）人: 寧夏農林科學院農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種馬鈴薯GATA轉錄因子，其核苷酸序列如序列表SEQ NO.1所示；所述馬鈴薯GATA轉錄因子編碼的蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的馬鈴薯GATA轉錄因子，其特征在于，所述馬鈴薯GATA轉錄因子為通過PCR方法提取的。

3.根據權利要求2所述的馬鈴薯GATA轉錄因子，其特征在于，所述PCR的引物序列分別如序列表SEQ NO.3～SEQ NO.6所示。

4.一種權利要求1所述的馬鈴薯GATA轉錄因子的克隆方法，包括以下步驟：

1)克隆馬鈴薯GATA轉錄因子基因；

2)構建包括馬鈴薯GATA轉錄因子基因的表達載體；

3)利用所述的表達載體轉化農桿菌；

4)使用轉化的農桿菌轉染馬鈴薯切片，誘導再生后篩選陽性馬鈴薯株系，將獲得的陽性株系轉入生根培養基獲得轉基因馬鈴薯陽性株。

5.權利要求4所述的馬鈴薯GATA轉錄因子的克隆方法，其特征在于，所述步驟1)為：提取馬鈴薯總RNA，使用試劑盒將mRNA反轉錄為總cDNA，分別使用核苷酸序列如序列表SEQNO.3～SEQ NO.6所示的引物進行PCR擴增，將擴增后的產物等體積混勻后作為模板，以SEQNO.5、SEQ NO.6為引物進行擴增，擴增產物為馬鈴薯GATA轉錄因子基因。

6.權利要求4所述的馬鈴薯GATA轉錄因子的克隆方法，其特征在于，所述步驟2)為：將步驟1)獲得的馬鈴薯GATA轉錄因子基因，克隆到pMD-18T載體，使用大腸桿菌篩選陽性克隆；在擴增的馬鈴薯GATA轉錄因子基因的引物兩側分別加上NdeI/XbaI酶切位點，以馬鈴薯RNA為模板進行PCR擴增，并將擴增產物克隆至pMD-18T載體，獲得陽性菌株后提取質粒DNA，利用NdeI/XbaI雙酶切帶有目的基因全長的質粒DNA，同時以NdeI/XbaI雙酶切植物表達載體，將各自的酶切產物回收后以1:2的質量比例混合，連接酶連接處理后，轉化大腸桿菌DH5α感受態篩選陽性克隆，獲得重組表達載體。

7.權利要求4所述的馬鈴薯GATA轉錄因子的克隆方法，其特征在于，所述步驟3)為：利用步驟2)包括構建的表達載體的重組質粒轉化農桿菌，篩選轉化的陽性農桿菌。

8.權利要求4所述的馬鈴薯GATA轉錄因子的克隆方法，其特征在于，所述步驟4)為：將陽性農桿菌在液體培養基中培養，浸染轉化馬鈴薯外植體，將所述馬鈴薯外植體在含Kan篩選的分化培養基培養后，轉入生根培養基中誘導生根，完成馬鈴薯植株的再生，并鑒定陽性植株即得。