[發(fā)明專利]用于控制害蟲的多核苷酸序列組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711440947.4
• 申請(qǐng)日: 2017-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN107893079B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董秋月
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州更藍(lán)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 李品

本發(fā)明涉及殺蟲劑領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及用于控制害蟲的多核苷酸序列組合物，所述殺蟲劑組合物包括SEQ ID NO:1、3、6所示的多核苷酸序列；或在嚴(yán)格條件下與限定的多核苷酸序列雜交的多核苷酸序列；或與限定的多核苷酸序列具有80％以上同一性的多核苷酸序列；或限定的多核苷酸序列的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸的多核苷酸序列，其中纓翅目昆蟲害蟲攝取包含與所述多核苷酸序列互補(bǔ)的至少一條鏈的雙鏈RNA，抑制所述纓翅目昆蟲害蟲的生長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于控制害蟲的多核苷酸序列組合物，涉及種植技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及抗蟲領(lǐng)域，特別是涉及一種利用RNAi技術(shù)下調(diào)或阻礙西花薊馬體內(nèi)靶標(biāo)序列的表達(dá)來抑制西花薊馬蟲害的方法。

背景技術(shù)

針對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的病蟲災(zāi)害，科研人員已經(jīng)成功開發(fā)出了一些方法和組合物。其中，化學(xué)殺蟲劑是預(yù)防和治理病蟲害的有效手段之一，但化學(xué)殺蟲劑的使用是一把雙刃劍，獲得良好效果的同時(shí)會(huì)伴有以下問題：1)化學(xué)殺蟲劑不具有靶標(biāo)選擇性，應(yīng)用化學(xué)殺蟲劑來控制有害昆蟲時(shí)對(duì)于非靶標(biāo)生物也會(huì)造成傷害，其中不乏有益生物。2)在施用化學(xué)殺蟲劑的土壤上，通常會(huì)表現(xiàn)出相應(yīng)時(shí)間的貧瘠狀態(tài)。3)化學(xué)殺蟲劑持續(xù)留存于環(huán)境中，降解速度慢，使得作物及環(huán)境中存在化學(xué)殺蟲劑的殘留，它們會(huì)積累于食物鏈中，人類作為食物鏈的頂端首當(dāng)其沖，這些化學(xué)殺蟲劑的積累導(dǎo)致多種疾病被誘導(dǎo)發(fā)生，例如癌癥。因此人們強(qiáng)烈需要對(duì)環(huán)境友善的殺蟲劑用于控制或根除作物生產(chǎn)中的昆蟲侵害。

本領(lǐng)域中已報(bào)道了RNAi反義技術(shù)下調(diào)或阻礙靶標(biāo)昆蟲相關(guān)基因以殺害難于在很多系統(tǒng)中使用，這有三個(gè)主要原因。首先，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)的反義序列不穩(wěn)定。第二，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)的反義序列的不穩(wěn)定性。第三，隨著不穩(wěn)定性和反義序列的運(yùn)送遇到的困難對(duì)于如下企圖來說也制造困難，所述企圖是：在編碼該反義序列的重組細(xì)胞內(nèi)部提供能有效調(diào)節(jié)目標(biāo)正義核苷酸序列表達(dá)水平的劑量。

RNA干擾或RNAi是用以在細(xì)胞或整個(gè)生物體環(huán)境下以序列特異性方式下調(diào)基因表達(dá)的一種方法，其通過特異性靶向選擇和高效mRNA遏制，可以達(dá)到定向干涉靶基因表達(dá)的目的。雖然利用RNAi技術(shù)來進(jìn)行害蟲防治是本領(lǐng)域的已知的，但是將這種技術(shù)用作控制昆蟲侵襲措施的關(guān)鍵因素是選擇最適當(dāng)?shù)陌谢颍垂δ苋笔?dǎo)致必需生物過程嚴(yán)重破壞和/或生物體死亡的那些基因。因此，本發(fā)明將下調(diào)害蟲中的特定靶基因作為一種手段來實(shí)現(xiàn)控制昆蟲侵襲，特別是控制植物的昆蟲侵襲。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于控制害蟲的多核苷酸序列組合物，即利用RNAi技術(shù)按下述方式來下調(diào)靶標(biāo)序列的表達(dá)：削弱昆蟲存活、生長(zhǎng)、繁殖、定殖特定環(huán)境和/或侵襲寄主的能力，以實(shí)現(xiàn)控制昆蟲侵襲及由其造成的損害。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種殺蟲劑組合物，包括至少一種分離的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列包括：

(a)SEQ ID NO:2、4、5所示的多核苷酸序列；或(b)在嚴(yán)格條件下與(a)限定的多核苷酸序列雜交的多核苷酸序列；或(c)與(a)限定的多核苷酸序列具有80％以上同一性的多核苷酸序列；或(d)相對(duì)于(a)限定的多核苷酸序列的至少19個(gè)連續(xù)核苷酸的多核苷酸序列，其中纓翅目昆蟲害蟲攝取包含與所述多核苷酸序列互補(bǔ)的至少一條鏈的雙鏈RNA，抑制所述纓翅目昆蟲害蟲的生長(zhǎng)；或(e)上述(a)、(b)、(c)或(d)限定的多核苷酸序列的互補(bǔ)序列。

進(jìn)一步地，所述多核苷酸序列還包括上述多核苷酸序列的互補(bǔ)序列，所述多核苷酸序列還包括間隔序列，優(yōu)選地，所述多核苷酸序列為SEQ ID NO:8、10或11，所述多核苷酸序列在有效連接的調(diào)控序列調(diào)控下構(gòu)成表達(dá)盒，所述多核苷酸序列為干擾核糖核酸序列。

進(jìn)一步地，所述干擾核糖核酸序列在被纓翅目昆蟲害蟲攝入后起到下調(diào)所述纓翅目昆蟲害蟲中至少一種靶標(biāo)序列表達(dá)的作用，其中所述干擾核糖核酸序列包含至少一個(gè)沉默元件，其中所述沉默元件是包含退火的互補(bǔ)鏈的一個(gè)雙鏈RNA區(qū)域，其中一條鏈包含與所述靶標(biāo)序列內(nèi)的一個(gè)靶標(biāo)片段至少部分地互補(bǔ)的一個(gè)核苷酸序列或由其組成，所述靶標(biāo)序列包含上述多核苷酸序列。