[發明專利]一種安普霉素的磁免疫化學發光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201711439680.7
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108362896B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 萬宇平;何方洋;劉清珺;曹東山;張瑜;馮月君;崔海峰;宋灝
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種安普霉素的磁免疫化學發光檢測試劑盒，它包括：酶標抗原、酶標抗原稀釋液、磁標抗體、磁標抗體稀釋液、安普霉素系列標準品溶液、化學發光底物A液、化學發光底物B液、復溶液、洗滌液，其中酶標抗原是辣根過氧化物酶標記的安普霉素半抗原，磁標抗體是免疫磁珠標記的安普霉素單克隆抗體。本發明還公開了一種利用上述試劑盒配套化學發光檢測儀檢測牛奶中安普霉素殘留量的方法，本方法對安普霉素檢測具有較高的靈敏度、特異性和較短的檢測時間。

技術領域

本發明涉及一種化學發光檢測試劑盒及其檢測方法，特別是檢測牛奶中安普霉素殘留量的磁免疫化學發光檢測試劑盒，屬于免疫學檢測領域。

背景技術

安普霉素(Apramycin，Apra)又名暗霉素、阿泊拉霉素、阿布拉霉素，是氨基糖苷類抗生素的典型代表藥物。安普霉素是美國禮來公司于1985年開發的新產品，目前我國也可生產，它是由黑暗鏈霉菌(Streptomyces tenebrarius)突變株發酵產生的。飼料中使用的多為安普霉素的硫酸鹽(Apramycin sulphate)，其為棕褐色結晶粉末或暗淡的黃色粉末，極性強，易溶于水，微溶于乙醇。

氨基糖苷類抗生素使用不當，會對動物的腎臟及聽覺產生毒副作用。因此，國內外相繼規定了氨基糖苷類抗生素在動物食品中的最高殘留限量。我國農業部于2002年12月14日235號公告發布的《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規定，安普霉素在豬的脂肪、肌肉中最高殘留限量為0.1μg/kg。

目前，在食品和飼料中，安普霉素的檢測方法主要有薄層色譜法、氣相色譜法、氣-質聯機和高效液相色譜法，由于以上諸分析法樣品前處理比較復雜，操作時需專門的技術人員、檢測費用昂貴，不利于推廣應用，因此亟需便攜、高靈敏度的快速檢測產品的出現。免疫檢測方法是以抗原、抗體的特異性反應為基本原理建立起來的快速分析方法，由于抗原、抗體的結合具有高選擇性和靈敏性，使得這一技術在藥物殘留檢測領域得到廣泛的應用。目前，最常用的免疫檢測方法包括酶聯免疫檢測法和膠體金免疫層析檢測法，但由于靈敏度較低，假陰性率和假陽性率較高，逐漸被靈敏度高、準確度高、檢測時間短的化學發光免疫檢測方法所替代。磁免疫化學發光檢測試劑配套磁免疫化學發光檢測儀檢測動物源性產品中安普霉素的殘留，實現檢測過程的全自動化，減少人為操作誤差，靈敏度高，準確度高，檢測成本低，適用于大批量樣品中安普霉素殘留量的篩查。

發明內容

本發明的目的在于提供一種安普霉素檢測試劑盒，采用該試劑盒進行安普霉素殘留量檢測時，具有較高的靈敏度、特異性和準確度。

本發明的另一個目的在于提供一種檢測安普霉素的方法，采用試劑盒配套化學發光檢測儀進行安普霉素殘留量檢測時，不僅具有較高的靈敏度、特異性和準確度，而且實現了全自動化檢測，縮短檢測時間，減少人為操作誤差。

本發明試劑盒，它包括：酶標抗原、酶標抗原稀釋液、磁標抗體、磁標抗體稀釋液、安普霉素系列標準品溶液、化學發光底物A液、化學發光底物B液、復溶液、洗滌液。

所述酶標抗原是辣根過氧化物酶標記的安普霉素半抗原，所述磁標抗體是免疫磁珠標記的安普霉素單克隆抗體，所述安普霉素單克隆抗體是由安普霉素半抗原與牛血清白蛋白偶聯得到的偶聯物作為免疫原免疫動物制備獲得；所述安普霉素半抗原是安普霉素被重鉻酸吡啶氧化為醛基安普霉素后，再與己二酸1-酰肼反應得到，其分子結構式為：

所述免疫磁珠表面含有—OH、—COOH或—NH₂活性基團。

所述化學發光底物A液為含有魯米諾和對甲苯酚的三羥甲基氨基甲烷溶液，化學發光底物B液為含有檸檬酸、無水Na₂HPO₄和CO(NH₂)₂·H₂O₂的水溶液。