[發明專利]一種檢測外泌體tRFRNA的方法

在審

• 申請號: 201711437529.X
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN108165613A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 甘武;戴和萍;蔡建飛;何俊麗
• 申請（專利權）人: 上海英拜生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6855
• 分類號: C12Q1/6855;C12N15/11
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 董濤

1.一種檢測外泌體tRF RNA的方法，其特征在于，所述方法包括：在tRF RNA兩端加上接頭序列,針對接頭序列和tRF RNA序列設計引物序列，進行擴增反應。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：所述在tRF RNA兩端加上接頭序列后，先要針對所述接頭序列設計預擴增引物，進行預擴增反應，然后再以預擴增產物為模板，針對接頭序列和tRF RNA序列設計引物序列，進行擴增反應。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述在tRF RNA兩端加上接頭序列包括：

1)提取待測樣品的外泌體RNA；

2)進行3’端加接頭序列反應；

3)根據3’端接頭序列設計引物，進行3’端引物雜交反應；

4)進行5’端加接頭序列反應；

5)進行逆轉錄反應。

4.根據權利要求1、2和/或3任一所述的方法，其特征在于，所述進行擴增反應包括進行實時熒光定量PCR反應。

5.根據權利要求1、2、3和/或4任一所述的方法，其特征在于，

所述接頭序列包括：序列表中SEQ ID№：1所示3’端接頭核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：3所示5’端接頭核苷酸序列；

所述針對接頭序列和tRF RNA序列設計的引物序列包括：序列表中SEQ ID№：6-SEQ ID№：12所示的至少一種正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：13-SEQ ID№：19所示反向引物核苷酸序列中的至少一種。

6.根據權利要求2、3、4和/或5任一所述的方法，其特征在于，所述預擴增引物序列包括：序列表中SEQ ID№：4所示正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：5所示反向引物核苷酸序列。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中根據3’端接頭序列設計的引物包括序列表中SEQ ID№：2所示核苷酸序列。

8.一種用于檢測外泌體tRF RNA的接頭序列或引物序列，其特征在于，

所述接頭序列包括序列表中SEQ ID№：1所示3’端接頭核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：3所示5’端接頭核苷酸序列；

所述引物序列包括：序列表中SEQ ID№：6-SEQ ID№：12所示的至少一種正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：13-SEQ ID№：19所示反向引物核苷酸序列中的至少一種。

9.一種用于檢測外泌體tRF RNA的組合物或試劑盒，其特征在于，所述組合物或試劑盒包括下述1)-3)中的至少一種：

1)權利要求8所述的接頭序列和引物序列；

2)序列表中SEQ ID№：4所示正向引物核苷酸序列和序列表中SEQ ID№：5所示反向引物核苷酸序列；

3)序列表中SEQ ID№：2所示核苷酸序列。

10.權利要求1-7任一所述方法、權利要求8所述接頭序列或引物序列、權利要求9所述組合物或試劑盒在檢測外泌體tRF RNA、或在制備檢測外泌體tRF RNA相關產品中的應用。