[發(fā)明專利]一種抗腫瘤注射制劑的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711436366.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN108226331B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 竇啟玲;楊青波;陸煜玫;段毅;高飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州益佰制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 貴州派騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 52114
• 代理人: 周黎亞

1.一種抗腫瘤注射制劑的檢測(cè)方法，所述注射制劑由斑蝥1-2份、人參30-70份、黃芪75-125份、刺五加130-180份制成注射液，所述檢測(cè)方法由性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測(cè)定項(xiàng)目組成；所述鑒別方法為α-萘酚顯色反應(yīng)，以異嗪皮啶為對(duì)照、以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6為展開劑、對(duì)制劑中刺五加藥材的薄層色譜鑒別，以及以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對(duì)照、以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10-20∶4-8∶0.5-2∶0.2-0.5為展開劑、對(duì)制劑中人參和黃芪藥材的薄層色譜鑒別；

所述檢查為溶液的顏色、pH值檢查，以甲醇：0.4％冰醋酸＝2-8:92-98為流動(dòng)相、對(duì)注射劑中5-羥甲基糠醛含量進(jìn)行的HPLC法檢查，以及對(duì)注射液中熾灼殘?jiān)嵩惓６拘浴⑦^敏反應(yīng)、溶血與凝聚、其他注射劑項(xiàng)目的檢查；

所述指紋圖譜是對(duì)制劑中人參、黃芪、刺五加藥材，以三氟醋酸的乙腈溶液為流動(dòng)相A，以三氟醋酸的水溶液為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫的HPLC法指紋圖譜表征過程；

所述含量測(cè)定是對(duì)制劑中人參總皂苷含量進(jìn)行測(cè)定，采用人參皂苷Re對(duì)照品為對(duì)照的紫外-可見分光光度法；對(duì)刺五加中所含的紫丁香苷、黃芪中所含的毛蕊異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行含量測(cè)定，采用甲醇為流動(dòng)相A、水為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫的HPLC法；對(duì)斑蝥所含斑蝥素含量進(jìn)行測(cè)定，采用以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷為固定相的氣相-毛細(xì)管色譜法；

其特征在于：具體的指紋圖譜表征方法如下：

按照中國(guó)藥典2015年版四部通則0512中高效液相色譜法測(cè)定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以含0.005-0.01％體積量的三氟醋酸的乙腈溶液為流動(dòng)相A，以含0.005-0.01％體積量的三氟醋酸的水溶液為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；柱溫為20℃；流速為每分鐘0.7ml；理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；

所述梯度洗脫條件為：

0-5min，流動(dòng)相A 2％，流動(dòng)相B 98％；

5-10min，流動(dòng)相A 2-5％，流動(dòng)相B 98-95％；

10-18min，流動(dòng)相A 5-10％，流動(dòng)相B 95-90％；

18-30min，流動(dòng)相A 10-15％，流動(dòng)相B 90-85％；

30-38min，流動(dòng)相A 15-20％，流動(dòng)相B 85-80％；

38-50min，流動(dòng)相A 20-23％，流動(dòng)相B 80-77％；

50-65min，流動(dòng)相A 23-38％，流動(dòng)相B 77-62％；

65-75min，流動(dòng)相A 38-55％，流動(dòng)相B 62-45％；

75-95min，流動(dòng)相A 55-100％，流動(dòng)相B 45-0％；

95-110min，流動(dòng)相A 100％，流動(dòng)相B 0％；

參照物溶液的制備：取紫丁香苷對(duì)照品、刺五加苷E對(duì)照品、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50％甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，搖勻，即得；

供試品溶液的制備：取注射液5-10ml，通過已預(yù)處理的固相萃取柱，先以水1ml洗脫，棄去水液，再用甲醇洗脫，收集洗脫液至2-4ml量瓶中，至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

測(cè)定法：分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄110分鐘的色譜圖，即得；

紫丁香苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測(cè)定方法如下：

照中國(guó)藥典2015年版四部通則0512中高效液相色譜法測(cè)定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；

所述梯度洗脫條件為：

0-10min，流動(dòng)相A 25％，流動(dòng)相B 75％；

10-13min，流動(dòng)相A 25-35％，流動(dòng)相B 75-65％；

13-30min，流動(dòng)相A 35-65％，流動(dòng)相B 65-40％；

30-31min，流動(dòng)相A 100％，流動(dòng)相B 0％；

31-35min，流動(dòng)相A 100％，流動(dòng)相B 0％；

對(duì)照品溶液的制備：取紫丁香苷對(duì)照品、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品，精密稱定，加50％甲醇制成每1ml含紫丁香苷25μg、毛蕊異黃酮葡萄糖苷15μg的混合溶液，即得；

供試品溶液的制備：取注射液，濾過，取續(xù)濾液，即得；

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。