[發(fā)明專利]Cry2Ah1蛋白的單克隆抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711434811.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN108047330B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張杰;耿麗麗;束長(zhǎng)龍;宋福平;彭琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C07K16/12
• 分類號(hào): C07K16/12;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京聿華聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11611
• 代理人: 劉烽

本發(fā)明涉及抗原?抗體蛋白質(zhì)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是本申請(qǐng)之一涉及Cry2Ah1蛋白的單克隆抗體，其能夠由保藏編號(hào)為CGMCC NO:14900的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗原-抗體蛋白質(zhì)的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及用于檢測(cè)Cry2Ah1蛋白的單克隆抗體。

背景技術(shù)

隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，大量的轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)入商品流通領(lǐng)域。目前以廣泛用于玉米、大豆、棉花等農(nóng)作物。cry2Ah1基因來(lái)源于蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)，cry2Ah1基因編碼Cry2Ah1蛋白，該蛋白對(duì)棉鈴蟲和玉米螟具有良好的殺蟲活性。

對(duì)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的管理，要從轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)開始。目前，對(duì)于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)主要有以DNA為目標(biāo)的檢測(cè)方法，例如以DNA為目標(biāo)的PCR法、Southern blot法和生物芯片法等；以及以蛋白為目標(biāo)的檢測(cè)方法，例如ELISA或膠體金快速檢測(cè)試紙條等。其中，DNA檢測(cè)雖然靈敏度高，但是由于不同農(nóng)作物的不同轉(zhuǎn)化事件cry2Ah1基因的檢測(cè)沒有通用的引物，對(duì)樣品的采集處理及提取方法重復(fù)性差，導(dǎo)致PCR結(jié)果假陽(yáng)性和假陰性率高，檢測(cè)方法繁瑣耗時(shí)、檢測(cè)成本高且需要配備較先進(jìn)昂貴的儀器，檢測(cè)人員也要經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)才能勝任。這些缺點(diǎn)使其不能承擔(dān)國(guó)際和國(guó)內(nèi)貿(mào)易中進(jìn)出口產(chǎn)品的大量或常規(guī)檢測(cè)工作，也難于在基層單位推廣使用。以蛋白為目標(biāo)的檢測(cè)方法，由于靈敏度不夠高，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和/或假陰性率高的問題。

為此，需要開發(fā)出一種能夠節(jié)省時(shí)間、降低檢測(cè)成本且操作更為簡(jiǎn)單的能夠準(zhǔn)確檢測(cè)轉(zhuǎn)cry2Ah1基因的轉(zhuǎn)基因植物的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)之一提供了一種Cry2Ah1蛋白的單克隆抗體，其能夠由保藏編號(hào)為CGMCCNo.14900的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。

所述單克隆抗體的親和力常數(shù)為1.58×10¹³l/mol。也就是說(shuō)，其與抗原的抗原決定簇的特異性結(jié)合強(qiáng)度非常高，顯著優(yōu)于制備過程中篩選到的Cry2Ah1蛋白的其他單克隆抗體(篩選過程中的這些單克隆抗體的親和力常數(shù)普遍在10⁸至10⁹l/mol左右)的結(jié)合強(qiáng)度，因而，該抗體的應(yīng)用比現(xiàn)有技術(shù)中的所述抗體的應(yīng)用更具有優(yōu)勢(shì)。使用本申請(qǐng)的Cry2Ah1單克隆抗體作為檢測(cè)含有cry2Ah1基因的轉(zhuǎn)基因植物時(shí)的靈敏度和特異性相當(dāng)高，因而更容易檢測(cè)到目標(biāo)基因，而不至于漏檢或錯(cuò)檢。這將對(duì)鑒定含有cry2Ah1基因的轉(zhuǎn)基因植物具有重要的意義，為我國(guó)的轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的管理邁出了堅(jiān)實(shí)的一步。

而且，利用Cry2Ah1蛋白抗原‐抗體反應(yīng)能夠準(zhǔn)確檢測(cè)含有cry2Ah1基因的轉(zhuǎn)基因植物，并且能夠節(jié)省時(shí)間，降低檢測(cè)成本，操作更為簡(jiǎn)單。

本申請(qǐng)之二提供了一株保藏編號(hào)為CGMCC No.14900的雜交瘤細(xì)胞株。

本申請(qǐng)之三提供了本申請(qǐng)之一所述的單克隆抗體的應(yīng)用。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述應(yīng)用為在鑒定Cry2Ah1蛋白中的應(yīng)用；即所述單克隆抗體在檢測(cè)樣品中是否含有如SEQ ID No.2所示蛋白的應(yīng)用。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述樣品選自農(nóng)田土壤和/或農(nóng)作物。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述農(nóng)作物選自處于生長(zhǎng)階段的農(nóng)作物、收獲后的農(nóng)作物和所述農(nóng)作物的種子中的至少一種。其中，處于生長(zhǎng)階段的農(nóng)作物和/或收獲后的農(nóng)作物的樣品的選取可以為所述農(nóng)作物的根、莖、葉、花、果實(shí)、籽粒中的至少一種，這可以根據(jù)本領(lǐng)域的需求或者Cry2Ah1蛋白的組織特異性表達(dá)部位進(jìn)行合適的選擇。

本申請(qǐng)之四提供了一種用于檢測(cè)Cry2Ah1蛋白的試劑盒，其所述試劑盒包括如本申請(qǐng)之一所述的單克隆抗體。

本申請(qǐng)的用于檢測(cè)Cry2Ah1蛋白的試劑盒包括但不限于ELISA試劑盒、酶免疫層析檢測(cè)試劑盒、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒以及免疫熒光檢測(cè)試劑盒。