[發明專利]一種氨基酸序列在識別氣味化合物中的應用

在審

• 申請號: 201711433086.7
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN109957002A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 郭孟博;劉楊;王桂榮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/12;G01N27/00
• 代理公司: 北京聿華聯合知識產權代理有限公司 11611
• 代理人: 劉建軍;劉烽

1.如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列在識別氣味化合物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述氣味化合物為反-2-己烯醇、肉桂醛、苯乙酸甲酯、4-乙基苯乙酮、反-3-己烯醇和正辛醇中的至少一種。

3.能夠編碼如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列在識別氣味化合物中的應用。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述氣味化合物為反-2-己烯醇、肉桂醛、苯乙酸甲酯、4-乙基苯乙酮、反-3-己烯醇和正辛醇中的至少一種。

5.根據權利要求3或4所述的應用，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

6.一種鑒別氣味化合物的方法，其包括如下步驟：

1)將第一氨基酸序列和第二氨基酸序列在細胞或昆蟲的觸角中進行共表達，得到表達有氣味受體二聚體的細胞或昆蟲的觸角；其中，第一氨基酸序列包括如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，第二氨基酸序列包括如SEQ ID No.11所示的氨基酸序列；

2)通過測定所述細胞或昆蟲的觸角在用氣味化合物刺激前后的細胞膜電位或神經元放電頻率變化來判斷所述氣味化合物是否能夠激活所述氣味受體二聚體。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述細胞為非洲爪蟾的卵母細胞；

優選地，在步驟1)中具體包括向非洲爪蟾的卵中導入第一核苷酸序列和第二核苷酸序列，之后培養所述非洲爪蟾的卵，得到表達有氣味受體二聚體的非洲爪蟾卵母細胞；其中，所述第一核苷酸序列包括依次從5’到3’的第一核苷酸非編碼序列，編碼SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列和第二核苷酸非編碼序列；第二核苷酸序列包括依次從5’到3’的第三核苷酸非編碼序列，編碼SEQ ID No.11所示的氨基酸序列的核苷酸序列和第四核苷酸非編碼序列；

優選地，第一核苷酸非編碼序列和第三核苷酸非編碼序列獨立地為SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；

優選地，第二核苷酸非編碼序列和第四核苷酸非編碼序列獨立地為SEQ ID No.9。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述第一核苷酸序列與所述第二核苷酸序列的質量比為0.8-1.2:1。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，將氣味化合物溶于1×Ringer，得到氣味化合物灌流液，將所述氣味化合物灌流液加入到灌流管中，利用雙電極電壓鉗系統測定所述表達有氣味受體二聚體的非洲爪蟾卵母細胞經所述氣味化合物灌流液刺激前后的電流值，根據經所述氣味化合物灌流液刺激前后得到的電流值的差值判斷所述氣味化合物是否能夠激活所述氣味受體二聚體。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于，在所述步驟2)中，1×Ringer的pH值為7.4-7.8，其包括如下組分：

9.5-9.7mM NaCl,0.15-0.25mM KCl,0.4-0.6mM MgCl₂-6H₂O,0.4-0.6mM HEPES,0.5-0.7mM CaCl₂。