[發(fā)明專利]在細(xì)胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)重組ADAMTS13的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711432166.0
• 申請(qǐng)日: 2011-07-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108060154A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·格里爾貝格爾;M·賴特爾;D·弗萊尚德?tīng)?/a>;G·布蘭貝格爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 百深有限責(zé)任公司;百深公司
• 主分類號(hào): C12N9/64
• 分類號(hào): C12N9/64;C07K14/755;C12P21/02;A61K38/36;A61K38/37;A61P7/04
• 代理公司: 上海華誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31300
• 代理人: 湯國(guó)華

1.一種用于生產(chǎn)重組ADAMTS13(rA13)組合物的方法，所述方法包括下述步驟：

(a)提供基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基；

(b)給所述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充銅，以提供至少1.0μg/L的最終銅濃度；

(c)提供一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞包含編碼rA13蛋白的核酸；

(d)在補(bǔ)充了銅的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，使得所述細(xì)胞表達(dá)rA13并將其分泌進(jìn)培養(yǎng)物上清液中；和

(e)回收所述培養(yǎng)物上清液的至少一部分，

其中在所述回收的培養(yǎng)物上清液中存在每天每升經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基至少1500單位FRETS-VWF73活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基是不含動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基是不含蛋白的培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基是化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的最終銅濃度是至少1μg/L銅。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的最終銅濃度是至少2μg/L銅。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的最終銅濃度是至少4μg/L銅。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的最終銅濃度是1μg/L至6μg/L銅。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的最終銅濃度是2μg/L至4μg/L銅。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中補(bǔ)充所述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的銅以銅鹽、銅螯合物或它們的組合的形式提供。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述銅鹽選自：硫酸銅、醋酸銅、碳酸銅、氯化銅、氫氧化銅、硝酸銅和氧化銅。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞是CHO細(xì)胞。

14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中培養(yǎng)所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞包括：所述細(xì)胞的分批培養(yǎng)。

15.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中培養(yǎng)所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞包括：所述細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)以恒化模式進(jìn)行。

17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)以灌注模式進(jìn)行。

18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的方法，其中在至少100L所述經(jīng)補(bǔ)充的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞。

19.根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其中在培養(yǎng)所述一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的步驟過(guò)程中，將細(xì)胞密度維持在小于4.0x106個(gè)細(xì)胞/mL。