[發明專利]一種吳茱萸汁中活性成分的檢測方法

在審

• 申請號: 201711431181.3
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN107843674A
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 劉群;黃勤挽;談宗華;吳統選;黃雪嬌;幸慧
• 申請（專利權）人: 天圣制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司50209
• 代理人: 高彬

技術領域

本發明涉及中藥吳茱萸活性成分的檢測，具體涉及一種吳茱萸汁中活性成分的檢測方法。

技術背景

吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸、疏毛吳茱萸、石虎的干燥近成熟果實，其味苦辛、性溫熱、有小毒；能溫中散寒、疏肝止痛。研究表明，吳茱萸含有豐富的吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯等成分。吳茱萸堿有健胃、鎮痛、止干嘔和止噯酸等功效；有利尿作用；對大腸桿菌有強力的抑制作用；對豬蛔蟲有顯著殺蟲作用；還有收縮子宮及升壓作用；治療早老性癡呆癥及中風有一定療效。吳茱萸次堿對心臟有正性肌力、正性變時作用和心臟保護作用，有擴血管和降壓作用，能松弛肛門內括約肌，抑制胃腸運動，對應激性潰瘍和潰瘍性結腸炎也有治療作用；對腦缺血再灌注損傷有保護作用，能抑制血小板聚集和動脈血栓形成；還有抗炎鎮痛、抗腫瘤等藥理作用。吳茱萸內酯具有抗腫瘤、昆蟲拒食、抗病毒、陣痛、抗炎、催眠等多種生物活性，還具有治療腸易激綜合征方面的療效。

經查，目前未有吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯同時檢測的文獻報道。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種吳茱萸汁中活性成分的檢測方法，該方法能同時檢測吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯，方法靈明度高，準確性高。

除特殊說明外，本發明所述份數均為重量份，所述百分比均為質量百分比。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：

一種吳茱萸汁中活性成分的檢測方法，其特征在于，采用如下步驟：將吳茱萸藥材粉末加12倍量水，浸泡30min，然后煎煮3次，每次煎煮30min制得吳茱萸水煎液，然后用旋轉蒸發儀回收溶劑，加入甲醇溶解，超聲提取30min，放冷后，加甲醇補足重量，過濾，濾液以16000r/min離心10min，取上清液用微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；精密稱取吳茱萸堿對照品、吳茱萸次堿對照品和吳茱萸內酯對照品、分別加甲醇溶解，16000r/min離心15min，取上清液即得對照品溶液，其中吳茱萸對照品溶液的濃度為97.6μg/ml，吳茱萸次堿對照品溶液的濃度為50.8μg/ml，吳茱萸內酯對照品溶液的濃度為0.102mg/ml；使用Kromasil C18柱色譜柱，以乙腈(A)-0.01％磷酸水(B)(51：49)為流動相，流速0.8-1.2mL/min，柱溫20-30℃，檢測波長215nm；然后根據吳茱萸堿與吳茱萸、吳茱萸次堿與吳茱萸以及吳茱萸內酯與吳茱萸各自的線性關系計算吳茱萸中的吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯的含量。

為了減少溶劑對檢測峰的影響，本發明上述甲醇優選100％甲醇。進一步，上述吳茱萸汁中活性成分的檢測方法，其特征在于：使用Kromasil C18柱色譜柱，進樣量為10μl，乙腈為A流動相，0.01％磷酸水為B流動相，流速1.0ml/min，柱溫25℃，檢測波長215nm。

具體的說，一種吳茱萸汁中活性成分的檢測方法，其特征在于，采用如下步驟：將吳茱萸藥材粉末加12倍量水，浸泡30min，然后煎煮3次，每次煎煮30min制得吳茱萸水煎液，然后用旋轉蒸發儀回收溶劑，加入100％甲醇溶解，超聲提取30min，放冷后，加100％甲醇補足重量，過濾，濾液以16000r/min離心10min，取上清液用微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；精密稱取吳茱萸堿對照品、吳茱萸次堿對照品和吳茱萸內酯對照品、分別加100％甲醇溶解，16000r/min離心15min，取上清液即得對照品溶液，其中吳茱萸對照品溶液的濃度為97.6μg/ml，吳茱萸次堿對照品溶液的濃度為50.8μg/ml，吳茱萸內酯對照品溶液的濃度為0.102mg/ml；使用Kromasil C18柱色譜柱，以乙腈(A)-0.01％磷酸水(B)(51：49)為流動相，流速1.0ml/min，進樣量為10μl，柱溫25℃，檢測波長215nm；按下式計算吳茱萸中的吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯的含量：

y_吳茱萸堿＝10853x_吳茱萸堿-59.248；

y_{吳茱萸次堿}＝5199.7x_{吳茱萸次堿}-14.244；

y_{吳茱萸內酯}＝524.77x_{吳茱萸內酯}-3.4308；