[發(fā)明專利]甘賴脯胰島素結(jié)晶的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711429491.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109957001B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳文君;王大梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘李藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/62
• 分類號(hào): C07K14/62;C07K1/30
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)甘賴脯胰島素結(jié)晶的制備方法，所述方法包括向含甘賴脯胰島素的結(jié)晶液中以兩步或更多步的方式添加Zn離子進(jìn)行兩步或更多步結(jié)晶，其中，以Zn與甘賴脯胰島素的質(zhì)量比計(jì)，第一步結(jié)晶時(shí)所添加的Zn離子的量為0.1％?0.8％，其它步結(jié)晶時(shí)所添加的Zn離子的量為0.1％以上，且各步所添加的Zn離子總量為0.4％以上。該制備方法能夠制備高質(zhì)量和高收率的甘賴脯胰島素結(jié)晶，易于甘賴脯胰島素的工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人胰島素類似物結(jié)晶的制備方法，具體地講，涉及甘賴脯胰島素(GlyA21-LysB28-ProB29-人胰島素)結(jié)晶的制備方法。

背景技術(shù)

糖尿病是胰島素分泌缺陷或作用不足導(dǎo)致的以高血糖為特征的代謝紊亂。據(jù)2012年11月統(tǒng)計(jì)，中國(guó)已經(jīng)躍居成為世界上糖尿病患者人數(shù)最多的國(guó)家，我國(guó)糖尿病患病人數(shù)每小時(shí)增加400人次，每天增加1萬(wàn)人次，患病總數(shù)已達(dá)到9420萬(wàn)，患病率高達(dá)9.7％，它的危害性僅次于心腦血管疾病和腫瘤。此外，我國(guó)約有3/4的糖尿病患者患有并發(fā)癥，患者的慢性高血糖狀態(tài)與長(zhǎng)期并發(fā)癥顯著相關(guān)，容易導(dǎo)致腎臟、眼、神經(jīng)、心臟和血管等眾多器官損害、功能障礙和功能衰竭，危害性極大。

胰島素治療一直被當(dāng)作是治療糖尿病并使血糖得到良好控制的重要手段。近年來(lái)，隨著胰島素技術(shù)的不斷發(fā)展，人們開(kāi)發(fā)出了具有不同作用時(shí)間的新一代胰島素，即胰島素類似物。其中一種新開(kāi)發(fā)的長(zhǎng)效胰島素類似物—甘精胰島素，正在越來(lái)越多被醫(yī)生和患者所接受和使用。但是，甘精胰島素在臨床應(yīng)用時(shí)也存在一些問(wèn)題：1.起效慢(起效時(shí)間約為1.5小時(shí))，對(duì)餐時(shí)血糖過(guò)高的患者，或偶爾進(jìn)餐較多的患者無(wú)法有效降低其餐后血糖；2.不能與其他胰島素混合使用，這是由于各種胰島素的等電點(diǎn)不同，甘精胰島素在酸性條件下穩(wěn)定，而天然胰島素及現(xiàn)有速效胰島素類似物在中性條件下穩(wěn)定，如果將甘精胰島素與其他胰島素直接混合，會(huì)導(dǎo)致甘精胰島素在注射前發(fā)生沉淀而不能施用，而其他胰島素在混合后也由于受混合物酸堿度變化的影響，穩(wěn)定性降低，安全性也隨即降低。因此，在甘精胰島素的包裝說(shuō)明書上，生產(chǎn)商特別注明不要將甘精胰島素與其他任何類型的胰島素混合。

然而，甘賴脯胰島素的出現(xiàn)解決了上述問(wèn)題，甘賴脯胰島素是一種快速起效且在酸性條件下穩(wěn)定的胰島素類似物。該胰島素類似物的A鏈A21位的天冬酰胺(Asn)突變?yōu)楦拾彼?Gly)、B鏈B28位的脯氨酸(Pro)突變?yōu)橘嚢彼?Lys)、B29位的賴氨酸(Lys)突變?yōu)楦彼?Pro)，其可以與長(zhǎng)效胰島素類似物如甘精胰島素混合，制成同時(shí)具有速效降糖和平穩(wěn)長(zhǎng)效降糖兩種功能的預(yù)混制劑，解決現(xiàn)有天然胰島素(豬、牛、人)和速效胰島素類似物在酸性環(huán)境下不穩(wěn)定，以及現(xiàn)有胰島素預(yù)混制劑不澄清，需引入外源蛋白(例如魚精蛋白)作緩釋劑而易產(chǎn)生免疫反應(yīng)，每日需早、晚注射兩次的問(wèn)題，使制劑安全性更高。

結(jié)晶形式的甘賴脯胰島素由于具有均一穩(wěn)定的固體分子形式，并且沉降體積小，易與上清分離，離心時(shí)間及凍干時(shí)間短，生產(chǎn)效率高，是更好的甘賴脯胰島素的應(yīng)用形式。因此亟需將甘賴脯胰島素制備成結(jié)晶，再應(yīng)用到胰島素制劑中。

在現(xiàn)有技術(shù)中有很多胰島素的結(jié)晶方法，例如在Abel J.J,PNAS,12:132(1926)、美國(guó)專利US2920104、中國(guó)專利CN95106555.6等中所描述的那些方法。但是，甘賴脯胰島素因其等電點(diǎn)為約5.3，與其他胰島素差異較大，應(yīng)用現(xiàn)有的胰島素結(jié)晶方法，并不能使甘賴脯胰島素形成結(jié)晶，只能形成無(wú)定形沉淀。，因此，亟需開(kāi)發(fā)一種甘賴脯胰島素結(jié)晶的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有上述問(wèn)題，提供一種甘賴脯胰島素結(jié)晶的制備方法，該方法可大規(guī)模地制備高質(zhì)量和高收率的甘賴脯胰島素-鋅結(jié)晶。該結(jié)晶具有穩(wěn)定的固體分子形式，易于大批量生產(chǎn)操作，沉降體積小，易與上清分離，離心時(shí)間及凍干時(shí)間短，生產(chǎn)效率高，與沉淀同批量的甘賴脯胰島素沉淀相比，離心處理時(shí)間將會(huì)縮短5-6倍。

胰島素結(jié)晶主要是通過(guò)胰島素與鋅離子結(jié)合成的六聚體按照正負(fù)離子之間的靜電引力相互堆積而成。常規(guī)胰島素在酸性條件下存在下述平衡：