[發明專利]一種神經母細胞瘤相關的腫瘤標志物及其應用

有效

• 申請號: 201711427416.1
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN107937526B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 趙蔚;何秋萍
• 申請（專利權）人: 徐州維康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;A61K31/7105;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 陳伯秋

本發明公開了一種神經母細胞瘤相關的腫瘤標志物PHF20，以及一種用于檢測PHF20的表達水平的試劑盒在神經母細胞瘤檢測和診斷或對患者預后評價中的應用，屬于腫瘤診斷和分子靶向治療領域。PHF20的表達高低與臨床病理學參數與患者預后密切相關，能夠作為一種神經母細胞瘤早期檢測的特異性腫瘤標志物或預后指標。

技術領域

本發明屬于腫瘤診斷和分子靶向治療領域，涉及一種神經母細胞瘤相關的腫瘤標志物及應用。

背景技術

神經母細胞瘤(Neuroblastoma,NB)屬于神經內分泌性腫瘤，主要起源于腎上腺髓質、頸上、胸腔等部位的交感神經節，臨床表現具有惡性度高、多樣性和易轉移等特點，是最常見的兒童期顱外實體瘤。該病多發于10歲以下的兒童，大約占兒童腫瘤發生的8-10％，年發病率大約為1/10萬，僅低于白血病和中樞神經系統腫瘤，雖少數可自行緩解，但是大多數預后較差，神經母細胞瘤具有明顯的異質性，對化療易產生耐藥性。目前，在對神經母細胞瘤的治療中，國際普遍傾向于使用高強度的化學治療，但該方法使得患者化療后嚴重感染的幾率較高；而另一方面，對于手術切除的治療方案而言，由于腫瘤對臟器與血管的侵犯傾向，手術又往往面臨著挑戰，術后并發癥的發生率約占20％，主要涉及腫瘤周圍血管及臟器的損傷。因此，找到和研究新的神經母細胞瘤生物標記物和防治靶標，為神經母細胞瘤的早期診斷和靶向治療打下了基礎，并具有重要的意義。

PHF20(NCBI登錄號NM_016436.4，Gene ID:51230，參見SEQ ID NO:5)最早發現于神經母細胞瘤的病人的血清自身抗體識別的抗原，其對于細胞重編程有表觀遺傳調控作用。PHF20蛋白含有多個功能域，其第2個Tudor區域可識別并結合p53，結合后會通過阻止p53的泛素化而穩定和并促進p53的活性轉錄。目前PHF20在神經母細胞瘤的臨床相關性仍然在很大程度上沒有被研究，而已有研究又報道其為癌基因，因此，探究其在腫瘤標志物上的應用顯得尤為重要。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種神經母細胞瘤腫瘤相關的腫瘤標志物。所述腫瘤標志物為PHF20。PHF20有望成為神經母細胞瘤腫瘤診斷和預后判斷的標志物，同時為神經母細胞瘤腫瘤的治療提供了新的靶點。發明人研究發現，PHF20在神經母細胞瘤細胞和腫瘤樣品中高表達，表達水平與病人不良生存預后存在顯著相關性，敲除PHF20對于神經母細胞瘤成瘤有明顯的抑制作用。因此，PHF20在神經母細胞癌發生發展過程中可能十分重要。因此PHF20可用于制備神經母細胞瘤腫瘤輔助診斷、療效預測及預后判斷制劑。還可用于制備神經母細胞瘤腫瘤輔助診斷、療效預測及預后判斷試劑盒。

所述神經母細胞瘤腫瘤干細胞輔助診斷、療效預測及預后判斷的試劑盒中包括PHF20和內參基因GAPDH RNA的特異性引物,PHF20的特異性上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，GAPDH RNA的上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示，GAPDH RNA的下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示。PCR引物見表1。所述試劑盒為實時熒光定量PCR檢測試劑盒和免疫學檢測試劑盒。實時熒光定量PCR檢測試劑盒所述特異性引物適用于SYBR Green的檢測。另外，試劑盒中還包括標準DNA模板和PCR反應體系，PCR反應體系中的PCR反應液為實時熒光定量PCR反應液，并進一步包含熒光染料。所述實時熒光定量PCR反應液包括dNTP、Mg2+、Taq酶及緩沖液，所述熒光染料為SYBR Green，Taq酶為熱啟動酶。免疫學檢測試劑盒所用PHF20抗體適用于免疫組化檢測。試劑盒包括標準切片陽性對照和免疫組化檢測相關試劑。

表1