[發(fā)明專利]動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物快速篩查試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711425929.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN109959793A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何方洋;萬宇平;馮才偉;扶勝;謝體波;袁光宇;吳紫潔;羅維超;程茹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543;G01N21/31;G01N21/33;G01N33/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種磺胺類藥物定性檢測杯。檢測杯包括兩部分,包含檢測磺胺類藥物的檢測杯及樣品稀釋液。所述檢測杯內(nèi)為凍干試劑，所述試劑為含0.2?0.5％苯酚，2?10U硝酸還原酶，2?5％殼聚糖，3?5％蔗糖，5?10％脫脂奶粉緩沖溶液。所述檢測杯為磺胺類藥物定性檢測杯，當(dāng)磺胺類藥物殘留量>80ppb檢測杯顯色為分紅色，磺胺類藥物殘留量越多顯色越深。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到一種快速篩查試劑盒，具體涉及檢測動(dòng)物食用組織/卵和動(dòng)物乳中磺胺類藥物殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及其檢測應(yīng)用。

背景技術(shù)

磺胺類藥物(Sulfonamides, SAs)是一大類具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)藥物的總稱，被用于細(xì)菌感染性疾病的預(yù)防和治療。磺胺類藥物具有廣譜的抗菌性、藥效持續(xù)穩(wěn)定、便宜易獲取等優(yōu)點(diǎn)，在飼料添加劑與作為動(dòng)物治療藥一直存在很大隱患。該藥物進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)，可蓄積在肉、卵和乳中，最終經(jīng)人食用進(jìn)入人體富集。從而，導(dǎo)致人體產(chǎn)生變態(tài)、過敏反應(yīng)，產(chǎn)生細(xì)菌性感染耐藥性，至致畸、致突變、致癌等嚴(yán)重后果。

有研究報(bào)到，歐盟甚國家中部分豬肉磺胺類藥物平均使用量達(dá)到4.82mg/kg，牛肉為17.2mg/kg，雞肉為0.033mg/kg，魚肉為58.5mg/kg；磺胺類藥物在各類食品中的檢出率高達(dá)20%。動(dòng)物源性食品檢出殘留，一方面，殘留的藥物對(duì)人體產(chǎn)生極大危害；另一方面，獸藥殘留也阻礙了動(dòng)物源性食品的進(jìn)出口貿(mào)易。因而，動(dòng)物源性食品中獸藥殘留對(duì)人體健康的影響已成為食品安全問題之一。獸藥在缺乏有效監(jiān)管的情況下被過分濫用，導(dǎo)致許多動(dòng)物源性食品中大量殘留。我國農(nóng)業(yè)部及歐美國家都規(guī)定了磺胺類在動(dòng)物性食品中的最高殘留限量0.1mg/kg。目前，對(duì)磺胺類藥物殘留檢測主要通過液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS）、高效液相色譜法（HPLC）、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）。三者相對(duì)專業(yè)操作強(qiáng)、大型儀器難以實(shí)現(xiàn)市場普及、快速檢測難以實(shí)現(xiàn)等問題。面臨這些困難開發(fā)一種能夠?qū)崿F(xiàn)快速方便、經(jīng)濟(jì)易行、實(shí)現(xiàn)大批量檢測的試劑盒非常有必要。本發(fā)明旨在開發(fā)一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物快速篩查試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明擬提供一種專門針對(duì)動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留檢測的試劑盒，并提供一種高效、準(zhǔn)確、簡便、滿足大批量樣本篩選的定性、定量檢測和試劑盒制備方法。

本發(fā)明所述的磺胺類藥物殘留檢測試劑盒，其主要包含以下試劑：包被磺胺類藥物偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液、磺胺類藥物單克隆抗體-堿性磷酸酶（AP）工作液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液所組成。

本發(fā)明所述的酶標(biāo)板制備具體步驟包括：

1) 將磺胺類半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到包被抗原；

2) 用碳酸鹽緩沖液稀釋包被抗原，100μL/孔，4℃包被過夜；

3) 取出酶標(biāo)板洗滌1次，拍干，加入含酪蛋白的PBS緩沖液，150μL/孔，37℃封閉2-3h；

4) 酶標(biāo)板封閉結(jié)束，洗滌3-5次，拍干后放置25℃恒溫晾干，抽檢合格后將酶標(biāo)板真空包裝，4℃保存。

本發(fā)明所述磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為0ng/mL、1ng/mL、3ng/mL、9ng/mL、27ng/mL、81ng/mL。

本發(fā)明所述磺胺類藥物單克隆抗體-AP工作液是將磺胺類免疫抗原經(jīng)人工免疫Balb/c小鼠，制備能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，由細(xì)胞株分泌純化得到單克隆抗體，單克隆抗體與堿性磷酸酶經(jīng)戊二醛法或碘酸鈉法制備獲得。

本發(fā)明所述顯色液包括試劑A/B/C，試劑A為10%二乙醇胺緩沖液，試劑B為5%對(duì)硝基苯磷酸二鈉（PNPP）緩沖液，試劑C為0.01%氯化鎂Tris-bace緩沖液。所述終止液為0.1mol/L氫氧化鈉，所述濃縮洗滌液為20倍濃縮洗滌液，具體是含0.5%Tween-20的0.2mol/L PBS，所述濃縮復(fù)溶液為為20倍濃縮復(fù)溶液，具體是0.1-0.2mol/L PBS，所述百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。