[發(fā)明專(zhuān)利]一種酶化學(xué)發(fā)光法測(cè)定糖化血清白蛋白的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711425423.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107870170B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李民友;藍(lán)媛;藺濤;張玲;齊宗獻(xiàn)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州市進(jìn)德生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 廣州勝沃園專(zhuān)利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發(fā)明屬醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測(cè)定血清糖化白蛋白與白蛋白濃度比值的試劑盒。所述試劑盒包括試劑R1、試劑R2、試劑R3、試劑R4。其中，試劑I含有蛋白變性劑、羥基烷基胺、胰蛋白酶、抗干擾劑、防腐劑、緩沖液；試劑II含有果糖氨基酸氧化酶、海藻糖、緩沖液；試劑III含有氨基酸氧化酶、海藻糖、緩沖液；試劑IIII為發(fā)光底物1,2?二氧雜環(huán)丁烷硼酸。本發(fā)明提供的試劑盒與現(xiàn)有的酶法檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理類(lèi)似，但成本較低，抗干擾性強(qiáng)，檢測(cè)準(zhǔn)確，性質(zhì)穩(wěn)定，便于廣泛應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶化學(xué)發(fā)光法測(cè)定糖化血清白蛋白與白蛋白濃度比值的試劑盒。

背景技術(shù)

人體中葡萄糖與蛋白質(zhì)發(fā)生非酶糖化反應(yīng)即形成糖化蛋白。果糖胺(GSP)是血清蛋白(主要是白蛋白)與葡萄糖發(fā)生非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物，由于白蛋白的半衰期為17～19天，故其值能反映測(cè)定前2～3周血糖的平均水平，是目前臨床上用來(lái)判斷短期血糖控制的指標(biāo)。但由于血清中非特異性還原物質(zhì)也可發(fā)生此反應(yīng)，加之不同蛋白組分的非酶糖化反應(yīng)率不同，故GSP檢測(cè)法特異性差。而糖化血清白蛋白(GA)檢測(cè)是在GSP的基礎(chǔ)上對(duì)GA進(jìn)行的定量測(cè)定，利用血清糖化白蛋白與血清白蛋白的百分比表示GA的水平，從而去除了血清白蛋白水平對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如何精確地測(cè)定出人血清中的糖化白蛋白量成為臨床檢測(cè)糖化白蛋白的關(guān)鍵。

目前市場(chǎng)上采用酶法檢測(cè)人血清中的糖化白蛋白相關(guān)產(chǎn)品的反應(yīng)原理為：首先使用蛋白酶將糖化蛋白消化成低分子量的糖化多肽，隨后使用果糖氨基酸酶催化糖化多肽發(fā)生氧化反應(yīng)生成多肽(或氨基酸)、葡萄糖醛酮和H₂O₂，釋放的H₂O₂通過(guò)終點(diǎn)反應(yīng)比色法來(lái)測(cè)定，其在600nm處的吸收值與糖化白蛋白的濃度成比例。由于酶法測(cè)定是基于H₂O₂與發(fā)色底物的氧化還原反應(yīng)而進(jìn)行測(cè)定，血液中存在的還原性物質(zhì)如抗壞血酸、尿素、膽紅素、乳糜等均會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，導(dǎo)致檢測(cè)的準(zhǔn)確性降低，因此，大部分的酶法檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)試劑通常含有抗壞血酸酶、膽紅素酶和尿素酶等，不僅增加成本，也給試劑使用的穩(wěn)定性增加難度。

另一方面，由于糖化白蛋白的特征在于賴(lài)氨酸殘基的ε-氨基的糖化，因此，需要果糖氨基酸酶高效地作用于被糖化的賴(lài)氨酸殘基。但通常情況下果糖氨基酸酶難以直接作用于蛋白質(zhì)，需預(yù)先通過(guò)蛋白酶處理來(lái)制備白蛋白的分解物，然后使果糖氨基酸酶作用于該分解物。然而血液樣本中的白蛋白與經(jīng)過(guò)精制的試劑水平的白蛋白不同，結(jié)合了膽紅素或脂蛋白等各種物質(zhì)，因此，難以通過(guò)蛋白酶獲得果糖氨基酸酶易于作用的片斷。因而，在測(cè)定血清或血漿等試樣中的白蛋白時(shí)，有必要在試樣中添加大量的蛋白酶來(lái)提高反應(yīng)性，但由此會(huì)產(chǎn)生以下問(wèn)題：成本高，并且由于存在大量的蛋白酶，導(dǎo)致在糖化白蛋白的測(cè)定體系中所用的其它酶如：過(guò)氧化氫酶、抗壞血酸氧化酶、膽紅素氧化酶等失活。

公開(kāi)號(hào)為CN 102565420 A的專(zhuān)利申請(qǐng)“人血清糖化白蛋白檢測(cè)試劑盒”包含試劑1和試劑2，其中試劑1由蛋白酶共表達(dá)體、緩沖液、過(guò)氧化物酶、4-氨基安替比林、防腐劑、穩(wěn)定劑組成；試劑2由緩沖液、果糖賴(lài)氨酸酶、N,N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺、防腐劑和穩(wěn)定劑組成，該試劑盒可提高蛋白酶對(duì)白蛋白的特定性，減少球蛋白的干擾，降低蛋白酶對(duì)抗壞血酸酶的影響。但試劑中的蛋白酶共表達(dá)體構(gòu)建比較復(fù)雜，且成本較高，不利于推廣。