[發(fā)明專利]用于檢測(cè)缺血性腦卒中血腦屏障早期損傷的抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711425374.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108191978B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吉訓(xùn)明;戚智鋒;劉克建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 北京開(kāi)陽(yáng)星知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11710
• 代理人: 要然

本發(fā)明涉及疾病檢測(cè)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種用于檢測(cè)缺血性腦卒中血腦屏障早期損傷的特異性抗體及其應(yīng)用。所述抗體的特點(diǎn)在于，其僅特異性識(shí)別occludin蛋白的降解片段中的KTRRKMDRYDKSNIL，而不識(shí)別occludin全長(zhǎng)蛋白，因此，可用于特異性檢測(cè)缺血性腦卒中的血腦屏障早期損傷，并可以排除血清中occludin全長(zhǎng)蛋白對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，顯著提高針對(duì)缺血性腦卒中血腦屏障早期損傷檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病檢測(cè)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及用于檢測(cè)缺血性腦卒中血腦屏障早期損傷的特異性抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腦卒中以其高發(fā)病率和高致殘率成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅人類健康的重要疾病，其中80％為缺血性腦卒中。最新發(fā)表在《柳葉刀》雜志的《全球疾病負(fù)擔(dān)報(bào)告》表明，腦卒中已經(jīng)成為中國(guó)第一位死亡原因。由于人口老齡化加速以及危險(xiǎn)因素控制欠佳，我國(guó)腦卒中發(fā)病率正以每年8.7％的速度迅速攀升；僅北京地區(qū)每年卒中病人治療費(fèi)用就超過(guò)100億，是沉重的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

靜脈溶栓是目前公認(rèn)的治療急性缺血性腦卒中最有效的方法之一。靜脈溶栓可以最大限度地挽救缺血腦組織，改善神經(jīng)功能，降低病人殘疾程度，提高生存質(zhì)量。組織纖溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator，tPA)是目前唯一通過(guò)FDA批準(zhǔn)的用于治療急性缺血性腦卒中的溶栓藥物。但是，tPA溶栓有非常苛刻的時(shí)間窗限制，安全期為腦卒中發(fā)生3小時(shí)內(nèi)，3-4.5小時(shí)為謹(jǐn)慎期。

由于時(shí)間窗苛刻，現(xiàn)階段符合溶栓治療適應(yīng)癥的病人比例很低。統(tǒng)計(jì)數(shù)字表明，發(fā)病后能夠在時(shí)間窗內(nèi)(3-4.5小時(shí)之內(nèi))到達(dá)醫(yī)院、并且使用tPA溶栓的病人比例很低：發(fā)達(dá)國(guó)家不到5％，在我國(guó)僅有不到1.6％。

延遲溶栓的主要風(fēng)險(xiǎn)是腦出血并發(fā)癥增加，導(dǎo)致病情加重甚至死亡。而腦血管破壞是出血轉(zhuǎn)化發(fā)生的主要原因。早在腦缺血溶栓之前，腦血管就已經(jīng)出現(xiàn)損傷，并隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng)、血管損傷加重。溶栓治療血流再通后，再灌注的血液從受損的血管中漏出，導(dǎo)致出血；加之tPA溶栓過(guò)程中血液纖溶系統(tǒng)活性亢進(jìn)，一旦發(fā)生出血很難及時(shí)止住，加重出血。

因此，亟需找到一種可以在發(fā)病早期評(píng)估血管損傷程度的標(biāo)記物，用來(lái)篩選那些在溶栓時(shí)間窗外(超過(guò)4.5h)但血管條件良好、可以接受溶栓的病人，以及排除在3-4.5h溶栓時(shí)間窗內(nèi)但有高出血轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)的病人，從而使更多的腦卒中病人可以接受溶栓治療。

目前，快速、準(zhǔn)確地血液標(biāo)記物檢測(cè)早期血管損傷的方法，可以幫助評(píng)估早期出血轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)，從而指導(dǎo)臨床上腦卒中早期的tPA溶栓。而且，該方法還可以進(jìn)一步預(yù)測(cè)腦組織保護(hù)藥物的效能，因?yàn)榻^大部分腦保護(hù)藥物都不能直接通過(guò)血腦屏障。早期的血腦屏障損傷還可以用于評(píng)價(jià)腦損傷及判斷預(yù)后，因此血腦屏障損傷的快速血液標(biāo)記物檢測(cè)還可以用于評(píng)價(jià)腦創(chuàng)傷的腦損傷程度。

密封蛋白o(hù)ccludin是組成血腦屏障的重要結(jié)構(gòu)蛋白之一，它負(fù)責(zé)封閉腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的縫隙，維持血腦屏障的完整。腦缺血后血管上的occludin會(huì)被降解，造成血腦屏障破壞。這些降解的片段會(huì)進(jìn)入血循環(huán)，并且在缺血早期就可以被檢測(cè)到。研究發(fā)現(xiàn)，occludin降解片段可以作為評(píng)價(jià)血腦屏障損傷的血液標(biāo)記物，從而確定血腦屏障損傷程度。但是目前還沒(méi)有特異性識(shí)別occludin降解片段的方法，無(wú)法排除血清中occludin全長(zhǎng)蛋白對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。而對(duì)血清中occludin全長(zhǎng)蛋白的識(shí)別，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，造成誤判。

因此，亟需提供一種可特異性識(shí)別occludin降解片段的物質(zhì)或方法，提高檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確率。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種可以特異性識(shí)別血清中occludin降解片段的抗體及其應(yīng)用，利用所述抗體對(duì)患者進(jìn)行檢測(cè)，可以排除血清中occludin全長(zhǎng)蛋白對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，顯著提高檢測(cè)結(jié)果的特異性。通過(guò)檢測(cè)樣品中蛋白片段濃度，將可以用于判斷缺血性腦卒中是否發(fā)生，以及發(fā)病程度。