[發明專利]一種土霉素片的生產工藝

在審

• 申請號: 201711425272.6
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN107904276A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 程玉柱;夏運喜;劉曉燕
• 申請（專利權）人: 安徽永生堂藥業有限責任公司
• 主分類號: C12P29/00
• 分類號: C12P29/00;C12R1/59
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙)11390
• 代理人: 胡劍輝

技術領域

本發明屬于生物制藥領域，具體涉及一種土霉素片的生產工藝。

背景技術

土霉素具有廣譜抗病原微生物作用，為快速抑菌劑，高濃度時對某些細菌呈殺菌作用。其作用機制在于藥物能特異性地與核糖體30S亞基的A位置結合，阻止氨基酰-tRNA在該位置上的聯結，從而抑制肽鏈的增長和影響細菌或其他病原微生物的蛋白質合成。土霉素對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、化膿性鏈球菌、淋球菌、腦膜炎球菌、大腸桿菌、產氣桿菌、志賀菌屬、耶爾森菌、單核細胞李斯特菌等有較強抗菌活性；此外，土霉素對立克次體、支原體、衣原體、放線菌等也有較強作用，土霉素的結構如式(1)：

土霉素屬傳統的發酵產品，是采用龜裂鏈霉菌在發酵過程中的次級代謝產物。目前所采用的土霉素生產工藝發酵時間長，所生產出來的土霉素收率低，通過721分光光度計進行質量檢測，在490nm光波下，普遍能夠檢測出大量雜質，嚴重影響后續制劑的質量和臨床療效。

發明內容

本發明的目的在于提供一種土霉素片的生產工藝，整體改進了傳統的土霉素的生產方法，優選了改進了菌種，采用超濾和納濾除去大多雜質，控制結晶速度得到高純度的土霉素，大大提高了成品土霉素片的質量。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種土霉素片的生產工藝，具體包括以下步驟：

(1)發酵液的制備：

制取土霉素發酵液，選用龜裂鏈霉菌培養基，所述龜裂鏈霉菌培養基的氮源為黃豆餅粉、淡黃色玉米漿、尿素和蛋清液，碳源為馬鈴薯粉、糊精；采用純種沉沒、通氣攪拌三級發酵培養的方式發酵制得土霉素發酵液；

(2)酸化

向土霉素發酵液中加枸緣酸調整酵液的pH值到2.30～2.50，然后再向發酵液中加鹽酸，調整發酵液的PH值到1.7～1.9；

(3)凈化

向酸化后的發酵液中加入絮凝劑，二者反應后，溶液中出現大量絮狀物；

(4)超濾

將步驟(3)產生的絮狀物的發酵液通入無機超濾器中，發酵液透過無機超濾膜，得到的凈化濾液；

(5)納濾

將步驟(4)得到的凈化濾液通入納濾機中進行納濾除去無機陽離子；

(6)脫色

納濾后的發酵液通入脫色處理器，采用聚酰胺樹脂進行脫色；

(7)結晶

向脫色后的發酵液中加入堿液，接著采用濃氨水調節pH值為4.5～4.8，調節pH后的發酵液溫度控制在28-32℃，加入土霉素晶種，采用稀氨水溶液緩慢調節發酵液的pH，待pH達到5.4時，停止pH的調節，靜置，使得土霉素結晶完全；

(8)冷凍干燥；

步驟(7)得到的結晶液過濾后得到的土霉素粗品，采用清水沖洗，將清洗后的土霉素晶體放入冷凍干燥機在進行冷凍干燥，即得到土霉素純品；

(9)成品加工

將土霉素純品放入球磨機中研磨過篩后與輔料混合制片，即得到土霉素片。

進一步，步驟(1)所述的三級發酵培養的方式具體如下：

a、斜面孢子制備：培養孢子條件：斜面孢子在35～38℃培養，濕度55％～60％，培養時間96～120h；接著

b、一級種子罐培養：培養溫度為29～32℃，設備密封，空氣攪拌，發酵25-30h后，移入二級種子罐；

c、二級種子罐培養：培養溫度為29～32℃，機械攪拌，通無菌空氣，發酵25-30h移入三級發酵罐；

d、三級發酵罐發酵：接種量為質量百分含量15～30％，發酵全程溫度控制在30～31℃，機械攪拌，發酵30-48h，發酵過程氧氣通氣量為：0.8～1.0v/m，即得土霉素發酵液。

進一步，步驟(2)所述的枸緣酸為50％的枸緣酸水溶液，所述的鹽酸為60％的鹽酸水溶液。

進一步，步驟(3)所述的絮凝劑為Na₂CO₃-二茂鐵-RuCl₃，加入絮凝劑的體積為發酵液體積的20-30％。

進一步，步驟(4)所述的無機超濾膜為中空纖維超濾膜。

進一步，步驟(7)所述的堿液為30％的碳酸鈉溶液，發酵液與堿液的體積比為1：0.01-0.05；所述的濃氨水為50％氨水溶液。

進一步，步驟(7)所述的稀氨水為10-18％的氨水溶液。

進一步，步驟(7)所述的緩慢調節為每小時pH上升0.3。

進一步，步驟(7)所述的靜置時間為30-60min。