[發明專利]一種臍帶組織凍存復蘇方法

有效

• 申請號: 201711424190.X
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN108130308B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 楊秋蕊;朱雪晶;翟志敏;馮煒煒;許嘯聲;吳紅平
• 申請（專利權）人: 上海慧存醫療科技有限公司;沈健
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/0775;A01N1/02
• 代理公司: 上海恒銳佳知識產權代理事務所(普通合伙) 31286
• 代理人: 黃海霞

本發明提供了一種臍帶組織凍存復蘇的方法，包含：步驟S1，切割臍帶組織以獲得第一組織條；步驟S2，將所述第一組織條浸泡在玻璃化液中，然后直接凍存所述第一組織條以獲得第二組織條；步驟S3，復蘇所述第二組織條以獲得第三組織條。其中，所述玻璃化液包括第一玻璃化液、第二玻璃化液和第三玻璃化液，所述步驟S2包括將所述第一組織條依次浸泡在所述第一玻璃化液、所述第二玻璃化液和所述第三玻璃化液中，然后將所述第一組織條移入液氮中冷凍保存，以獲得所述第二組織條。本發明利用玻璃化法來凍存并復蘇所述臍帶組織條，在縮短操作時間和提高凍存效率的同時降低了凍存復蘇過程中所述臍帶組織的壞死率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種臍帶組織凍存復蘇方法以及間充質干細胞分離方法。

背景技術

臍帶是胎兒時期連接母體與胎兒的重要物質，為索狀結構，其外為一層羊膜，內含兩條臍動脈和一條臍靜脈，血管與羊膜之間含有特殊的胚胎粘液樣的臍帶組織，從臍帶組織中分離得到的間充質干細胞可用于治療多種疾病。

常用的獲得間充質干細胞的方法是先從臍帶組織中分離出間充質干細胞冷凍保存，使用時再解凍處理，此過程時間長，操作難度大；而先保存臍帶組織，待需要使用間充質干細胞時再對臍帶組織進行復蘇和分離處理，則能夠節省時間并降低操作難度。但臍帶組織在離體情況下活力會漸漸下降，進而影響分離得到的間充質干細胞的數量和質量，如何能夠長時間保存臍帶組織并維持間充質干細胞的活性是當前阻礙臨床應用的一大難題。

公開號為CN104145943的中國發明專利公開了一種臍帶組織的凍存方法，該專利用含有5-10％滲透性冷凍保護劑、1-5％非滲透性冷凍保護劑、血清替代品和基礎培養基的凍存液對剝離血管后得到的臍帶組織進行程序降溫，以保存臍帶組織。但上述方法操作時間長且在凍存過程中臍帶組織的壞死率較高。

因此，有必要設計一種新型的臍帶組織處理方法以解決上述技術問題。

發明內容

本發明提供了一種簡單有效的臍帶組織凍存復蘇方法，以獲得間充質干細胞，避免現有技術存在的操作時間長和臍帶組織壞死率高的問題。

為了實現上述目的，本發明的技術方案包括：

步驟S1：獲取臍帶組織，切割所述臍帶組織以獲得第一組織條；

步驟S2：將所述第一組織條浸泡在玻璃化液中，然后直接凍存所述第一組織條以獲得第二組織條；

步驟S3：復蘇所述第二組織條以獲得第三組織條。

所述玻璃化液包括第一玻璃化液、第二玻璃化液和第三玻璃化液，所述步驟S2包括將所述第一組織條依次浸泡在所述第一玻璃化液、所述第二玻璃化液和所述第三玻璃化液中，然后將所述第一組織條移入液氮中冷凍保存，獲得所述第二組織條。

本發明所述臍帶組織的凍存復蘇方法，其有益效果在于：將所述第一組織條依次浸泡在所述第一玻璃化液、所述第二玻璃化液和所述第三玻璃化液中，采用直接凍存的方法將所述第一組織條凍存以獲得所述第二組織條，縮短了降溫時間，能有效防止細胞內冰晶的形成，減少組織壞死和凋亡，提高凍存和復蘇效果。

進一步地，所述臍帶組織包括羊膜層，所述步驟S1包括撕離所述臍帶組織的所述羊膜層。

進一步地，所述臍帶組織包括臍動脈，所述步驟S1包括撕離所述臍帶組織的所述臍動脈。

進一步地，所述第一組織條在所述第一玻璃化液、所述第二玻璃化液和所述第三玻璃化液中的浸泡時間均為2-7min，所述第一玻璃化液、所述第二玻璃化液和所述第三玻璃化液的溫度均為2-6℃。