[發(fā)明專利]用于鑒定黃精屬種質(zhì)資源的SSR分子標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711424074.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107893126B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧欣;朱巧;梅時(shí)勇;陳小軍;張冀芳;肖清明;黎宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發(fā)明提供了用于鑒定黃精屬種質(zhì)資源的SSR分子標(biāo)記及應(yīng)用，屬于植物分子標(biāo)記輔助種質(zhì)資源鑒別技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的SSR分子標(biāo)記為以下7個(gè)中任一或多個(gè)SSR分子標(biāo)記，7個(gè)SSR分子標(biāo)記分別由如SEQ ID NO.1?14所示的引物擴(kuò)增得到。本發(fā)明提供的SSR分子標(biāo)記可將黃精屬內(nèi)不同種質(zhì)區(qū)分開(kāi)來(lái)，操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，可有效克服用表型鑒定方法難以準(zhǔn)確區(qū)分不同黃精屬種質(zhì)的缺點(diǎn)，在黃精種質(zhì)資源鑒別及分子標(biāo)記輔助育種中具有重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物分子標(biāo)記輔助種質(zhì)資源鑒別技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及用于鑒定黃精屬種質(zhì)資源的SSR分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

黃精屬(Polygonatum Mill.)為百合科(Liliaceae)多年生草本植物，根莖橫走，圓柱狀，結(jié)節(jié)膨大，常以干燥根莖入藥。該屬植物全球大約有40余種，我國(guó)約有31種。其中，黃精、多花黃精和滇黃精是《中華人民共和國(guó)藥典》收錄了三種黃精的“原生藥”。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明黃精具有抗衰老的作用、降血糖和免疫調(diào)節(jié)作用、提高學(xué)習(xí)和記憶能力、抗動(dòng)脈硬化和對(duì)心血管系統(tǒng)的作用、抗腫瘤作用、抗炎、抗病原微生物等作用，是一種生理活性顯著，極具開(kāi)發(fā)利用價(jià)值的藥用植物資源。近幾年,黃精制品紛紛開(kāi)發(fā)成功，黃精配方顆粒、黃精茶、黃精花粉茶、黃精口服液、黃精酸奶、黃精糯米酒等一系列產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)到市場(chǎng)上，隨著黃精藥用價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值的提高，市面上出現(xiàn)了一些偽黃精以及以次充好的現(xiàn)象，甚至一些誤食中毒的現(xiàn)象也有發(fā)生。黃精屬植物不同種之間分布區(qū)存在重疊現(xiàn)象，并且有些種變異幅度大，存在較多的中間類型，所以僅從形態(tài)學(xué)上的角度難以區(qū)分。

目前，RAPD、RFLP、ISSR、SCoT、SSR分子標(biāo)記技術(shù)已應(yīng)用到黃精種鑒定、遺傳多樣性分析和種質(zhì)資源保護(hù)研究中。微衛(wèi)星標(biāo)記(microsatellite)又被稱為短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats，STRs)或簡(jiǎn)單重復(fù)序列(simple sequence repeats，SSR)，是均勻分布于真核生物基因組中的簡(jiǎn)單重復(fù)序列，由2～6個(gè)核苷酸，甚至更多核苷酸為基本單位組成的串聯(lián)重復(fù)序列片段，其長(zhǎng)度大多在200bp以內(nèi)，普遍存在于真核生物和原核生物基因組中，分布于編碼區(qū)和非編碼區(qū)。由于重復(fù)單位的重復(fù)次數(shù)在個(gè)體間呈高度變異性并且數(shù)量豐富，具有擴(kuò)增穩(wěn)定，特異性高，共顯性，開(kāi)發(fā)成本相對(duì)低等優(yōu)點(diǎn)，因此微衛(wèi)星標(biāo)記的應(yīng)用非常廣泛。由于SSR標(biāo)記具有共顯性、高度重復(fù)性、多態(tài)性好、穩(wěn)定可靠、經(jīng)濟(jì)方便等優(yōu)點(diǎn)，SSR標(biāo)記完全符合作物品種鑒別的4個(gè)基本準(zhǔn)則，即環(huán)境的穩(wěn)定性、品種間變異的可識(shí)別性、最小的品種內(nèi)變異和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，其已成為作物種質(zhì)資源鑒定的一種理想分子標(biāo)記，該標(biāo)記可通過(guò)比較材料之間的擴(kuò)增條帶，就可以較好地將同一物種的不同品種的親緣關(guān)系進(jìn)行有效鑒定評(píng)價(jià)，鑒定結(jié)果客觀公正、可靠性高。

目前黃精SSR分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)緩慢，已公布的黃精屬SSR分子標(biāo)記數(shù)97個(gè)，其中僅有40個(gè)黃精SSR分子標(biāo)記具有較高的多態(tài)性，能夠利用的黃精微衛(wèi)星分子標(biāo)記數(shù)量非常有限，且既往對(duì)黃精遺傳多樣性的研究材料或SSR引物太少，使得篩選的引物缺乏代表性，因此，急需開(kāi)發(fā)能夠區(qū)分鑒定黃精屬不同種植物的SSR分子標(biāo)記。

SLAF-seq(Specific-Locus Amplified Fragment Sequencing)技術(shù)是基于簡(jiǎn)化代表庫(kù)測(cè)序(RRLs)及高通量雙端測(cè)序的一種有效的測(cè)序方法，具有高通量、測(cè)序錯(cuò)誤率低、低成本等特點(diǎn)，近年來(lái)廣泛地應(yīng)用于植物的分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)中，但目前此方法還沒(méi)有運(yùn)用到黃精屬SSR標(biāo)記開(kāi)發(fā)中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種利用SLAF-seq技術(shù)開(kāi)發(fā)得到的可快速、準(zhǔn)確鑒定黃精屬(Polygonatum Mill.)種質(zhì)資源的SSR分子標(biāo)記。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述分子標(biāo)記在鑒定黃精屬(Polygonatum Mill.)種質(zhì)中的應(yīng)用。