[發明專利]一種靶向CD22的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711423020.X
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN109957023A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 張宏玲;龍麗梅;鐘春穎
• 申請（專利權）人: 深圳賓德生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K5/10;C12N15/867;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

1.一種靶向CD22的單鏈抗體，其特征在于，所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。

2.如權利要求1所述的靶向CD22的單鏈抗體，其特征在于，所述靶向CD22的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

3.一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，包括靶向CD22的嵌合抗原受體CAR-CD22，所述CAR-CD22包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD22的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列，其中所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。

4.如權利要求3所述的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述胞外鉸鏈區包括CD8α鉸鏈區，所述跨膜區包括CD8跨膜區，所述胞內信號區包括從氨基端到羧基端順次連接的CD27信號區和CD3ζ信號區。

5.如權利要求4所述的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述CAR-CD22的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

6.如權利要求3或4所述的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述CAR-CD22的編碼基因包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

7.一種重組病毒載體，其特征在于，所述重組病毒載體包括如權利要求3-6任一項所述的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的CAR-CD22的編碼基因序列。

8.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包括如權利要求7所述的重組病毒載體。

9.一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的制備方法，其特征在于，包括：

(1)提供靶向CD22的嵌合抗原受體CAR-CD22的編碼基因，包括從5’端到3’端順次連接的信號肽的編碼基因、靶向CD22的單鏈抗體的編碼基因、胞外鉸鏈區的編碼基因、跨膜區的編碼基因和胞內信號區的編碼基因；所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，所述靶向CD22的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

(2)將所述CAR-CD22的編碼基因插入到pWPXLD載體中，得到pWPX LD-CAR-CD22重組質粒；

(3)將所述pWPXLD-CAR-CD22重組質粒與包膜質粒、包裝質粒共轉染宿主細胞，得到重組慢病毒；

(4)將所述重組慢病毒轉染CD3陽性T淋巴細胞，獲得靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞。

10.一種如權利要求1-2任一項所述的靶向CD22的單鏈抗體、如權利要求3-6任一項所述的或如權利要求9所述的制備方法制得的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞、如權利要求7所述的重組病毒載體或如權利要求8所述的宿主細胞在制備預防、診斷和治療惡性腫瘤藥物中的應用。