[發明專利]一種靶向DR5的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711422905.8
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN109957020A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 張宏玲;龍麗梅;鐘春穎
• 申請（專利權）人: 深圳賓德生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K5/10;C12N15/867;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發明提供了一種靶向DR5的單鏈抗體，所述靶向DR5的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本發明還提供了一種包括所述靶向DR5的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞，所述靶向DR5的嵌合抗原受體可以專一性地靶向DR5，促進T細胞在患者體內的擴增，可以高效且特異性的殺傷腫瘤細胞，更好的維持細胞的活力和殺傷力，并且對正常細胞不會造成損傷。本發明還提供了一種靶向DR5的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

技術領域

本發明涉及醫學生物領域，特別涉及一種靶向DR5的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

癌癥已成為威脅人類生命的元兇，發病率成上升趨勢，人們從尋找誘導引起腫瘤細胞凋亡或者克服腫瘤細胞對凋亡耐受的角度入手，發現了腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)，是能夠誘導細胞凋亡的腫瘤壞死因子超家族成員。死亡受體5(death receptor5；DR5)屬腫瘤壞死因子受體超家族成員(TN FRSF10B)，其胞質區含死亡結構域，主要分布于腫瘤細胞。TRAIL與細胞表面DR5結合，可誘導細胞凋亡。DR5在肝癌等多種實體瘤細胞中廣泛表達，而在普通細胞中表達很微弱的細胞表面抗原。

免疫細胞治療是現有科技中唯一有可能徹底清除癌細胞的方法，其治療腫瘤具有特異性強、幾乎無毒副作用的巨大優勢彌補了傳統療法的弊端，在國內外已經用于臨床治療惡性腫瘤，嵌合抗原受體T細胞技術(CAR-T)為當前過繼性細胞回輸治療技術最新的免疫細胞技術之一，因其能夠在體內能激活自身免疫系統，持續性地靶向腫瘤細胞進行殺傷，最終達到清除惡性腫瘤細胞的目的而受到廣泛的關注和研究。目前還未有靶向DR5的嵌合抗原受體T細胞的制備和研究。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種靶向DR5的單鏈抗體，以及包括所述靶向DR5的單鏈抗體的靶向DR5的嵌合抗原受體T細胞。所述靶向DR5的嵌合抗原受體可以專一性的靶向DR5，促進T細胞在患者體內的擴增，可以高效且特異性的殺傷腫瘤細胞，更好的維持嵌合抗原受體T細胞的活力和殺傷力，并且對正常細胞不會造成損傷。本發明還提供了一種靶向DR5的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

第一方面，本發明提供了一種靶向DR5的單鏈抗體，所述靶向DR5的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

可選的，所述靶向DR5的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可選的，所述靶向DR5的單鏈抗體編碼基因應該考慮簡并堿基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的編碼基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保護范圍還應該保護與SEQ ID NO:2具有堿基簡并性質的核苷酸序列，這些核苷酸序列對應的氨基酸序列仍然為SEQ ID NO:1。

本發明第一方面提供的所述靶向DR5的單鏈抗體能夠與DR5蛋白發生特異性結合，對腫瘤細胞特別是表達DR5的實體瘤細胞具有較強的親和活性。

第二方面，本發明提供了一種靶向DR5的嵌合抗原受體T細胞，包括靶向DR5的嵌合抗原受體CAR-DR5，所述CAR-DR5包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向DR5的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列，其中所述靶向DR5的單鏈抗體包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“從氨基端到羧基端順次連接”具體為：所述靶向DR5的單鏈抗體的氨基酸序列的羧基端與所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的氨基端相連，所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的羧基端與所述跨膜區的氨基酸序列的氨基端相連，所述跨膜區的氨基酸序列的羧基端與所述胞內信號區的氨基酸序列的氨基端相連。

本發明中，所述胞外鉸鏈區用于促進所述靶向DR5的單鏈抗體與腫瘤上的DR5結合?？蛇x的，所述胞外鉸鏈區包括CD8α鉸鏈區、CD28鉸鏈區、CD4鉸鏈區、CD5鉸鏈區、CD134鉸鏈區、CD137鉸鏈區、ICOS鉸鏈區中的一種或多種的組合。