[發(fā)明專利]一種紫色馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711422205.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN107873522A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許建民;王媛花;顏志明;解振強(qiáng);王姍;仇學(xué)文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)32204
• 代理人: 王艷麗,許丹丹

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)，尤其涉及一種紫色馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

紫色馬鈴薯屬茄科一年生作物，原產(chǎn)安第斯山區(qū)。薯型長(zhǎng)橢圓型，表皮光滑，薯肉呈紫黑色，富含花青素、Vc、胡蘿卜素等，兼具食用、藥用功能?；ㄇ嗨厥谴嬖谟谥参镏械乃苄陨?，屬類黃酮化合物，是目前科學(xué)界發(fā)現(xiàn)的防治疾病，維護(hù)人類健康最直接、最有效、最安全的自由基清除劑，其清除自由基的能力是VC的20倍，VE的50倍。此外，紫馬鈴薯塊莖淀粉含量高，口感較好，品質(zhì)極佳，適合深加工。因此，紫馬鈴薯具有很好的研究開發(fā)和綜合利用價(jià)值。

但在紫馬鈴薯的田間試植和組培快繁的過程中，存在以下兩個(gè)問題:

一是紫馬鈴薯田間植株病毒發(fā)病嚴(yán)重。經(jīng)檢測(cè)，馬鈴薯病毒病是由18種病毒復(fù)合侵染所致，其中，9種是專門寄生于馬鈴薯的病毒，另9種是來自其它寄主植物的病毒。其中的馬鈴薯Y病毒(Potato Virus Y,PVY)、馬鈴薯卷葉病毒(Potato Leafroll virus,PLRV)、馬鈴薯X病毒(Potato Virus X-PVX)及馬鈴薯S病毒(Potato Virus S,PVS)，這4種是危害馬鈴薯(包括紫馬鈴薯)最嚴(yán)重的病毒，是農(nóng)業(yè)部嚴(yán)格規(guī)定必須植檢的重點(diǎn)病毒種類；同時(shí)這些病毒又均具有難以分離、純化的特點(diǎn)。

二是紫馬鈴薯組培快繁污染率高。在采用傳統(tǒng)馬鈴薯莖尖脫毒的情況下，存在有操作難度大、工作效率低(在顯微鏡下，用手術(shù)工具連續(xù)剝離十余層包裹于莖尖外的莖片)，導(dǎo)致難以徹底剝離與消毒，一般外植體污染率高達(dá)60％左右；同時(shí)還存有外植體分化速度和脫毒試管苗繁殖速度較慢，微型薯長(zhǎng)勢(shì)弱及移植大田生產(chǎn)薯畝產(chǎn)偏低等問題。

目前，采用以紫馬鈴薯塊莖為外植體進(jìn)行脫毒和組培快繁的技術(shù)，目前鮮見有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)紫色馬鈴薯組培傳統(tǒng)莖尖脫毒技術(shù)所存在的操作繁瑣、效率低、消毒難徹底、組培苗污染率高等問題，本發(fā)明提出一種操作簡(jiǎn)便、效率高、消毒易徹底、外植體污染率低、繁殖速度快，苗質(zhì)好的紫色馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的紫色馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，包括：以紫色馬鈴薯的塊莖為外植體，接種于分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷，愈傷形成后取愈傷再次接種于分化培養(yǎng)上進(jìn)行培養(yǎng)，獲得脫毒幼苗；將所述的脫毒幼苗接種于繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖；其中，所述的分化培養(yǎng)基含有1.5-2.5mg/L NAA和4.5-5.5mg/L6-BA。

所述分化培養(yǎng)基的組成為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+1.5-2.5mg/L NAA+4.5-5.5mg/L6-BA+30-32g糖/L+6.8-7.2g/L瓊脂，ph為5.8-6.0。

優(yōu)選的，NAA的濃度為2-2.5mg/L NAA，6-BA的濃度為5-5.5mg/L。.

誘導(dǎo)愈傷的條件為：光照強(qiáng)度4000-4500Lux，溫度25-27℃，每日光照時(shí)間為14-16小時(shí)。

所述繼代培養(yǎng)基的組成為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30-32g糖/L+6.8-7.2g/L瓊脂，ph為5.8-6.0。

所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，糖為蔗糖。

所述外植體的制備方法為：將紫色馬鈴薯的塊莖消毒后去皮，取薯心部分，切割成薯塊。

所述消毒方法包括：將馬鈴薯塊莖流水沖洗30-40min，無菌條件下，用去離子水沖洗2-3次，再用70-75％的乙醇消毒2-3min后用無菌去離子水沖洗2-4次，然后用0.1-0.2％的氯化汞溶液浸泡5-8min，最后用無菌去離子水沖洗2-3次。

紫色馬鈴薯的品種為“轉(zhuǎn)心烏”或“黑金剛”。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明將常規(guī)的紫色馬鈴薯脫分化和再分化的培養(yǎng)基進(jìn)行了簡(jiǎn)化，只需要一種分化培養(yǎng)基，分兩次培養(yǎng)，即可完成脫分化和再分化的過程，且通過選擇合適的外植體，改進(jìn)培養(yǎng)基，大大的降低了污染率，提高了愈傷成苗率，降低了組培苗的病毒攜帶率。污染率降低到了2％以下，愈傷分化成苗率達(dá)到了83％以上，幼苗的病毒攜帶率降低到了0.7％以下。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實(shí)施例1：以紫色馬鈴薯“轉(zhuǎn)心烏”為實(shí)驗(yàn)材料

1、培養(yǎng)基的配置

(1)分化培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+1.5mg/L NAA+4.5mg/L 6-BA+30g糖/L+7g/L瓊脂。