[發(fā)明專利]一種光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711421443.8
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN108094206A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡進耀;別鵬飛;向莉;余凌帆;王虹;馬月琴
• 申請（專利權(quán)）人: 綿陽師范學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

步驟一，采集光葉蕨地下莖；

步驟二，將光葉蕨地下莖置于濃度為3～5g/mL的洗衣粉溶液中浸泡1～3min，切割修整，剩0.3～0.5cm的芽端，用75％乙醇浸泡10～30s，再用0.01％升汞溶液浸泡1～3min；

步驟三，向1/2MS培養(yǎng)基中加入NAA、6-BA，蔗糖濃度為20g/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為5.8～6.0；120～125℃滅菌20～25min，冷卻至室溫，備用；將消毒后的芽接種至培養(yǎng)基中，24±1℃、2000～2100lx條件下，光照8～10h/d；NAA加入量為0～0.1mg/L、6-BA加入量為0.05～0.15mg/L；

步驟四，所得產(chǎn)物接種至含有NAA、6-BA的1/2MS培養(yǎng)基中，24±1℃、2000～2100lx條件下，光照8～10h/d，增殖培養(yǎng)，得到光葉蕨苗；其中，1/2MS培養(yǎng)基中NAA加入量為0.5～1.5mg/L、6-BA加入量為0.5～1.5mg/L、GA3加入量為1.5～2.5mg/L；

步驟五，用含有NAA、6-BA、GA3的1/2MS培養(yǎng)基，24±1℃、2000～2100lx條件下，光照8～10h/d，培育所得光葉蕨苗；其中，NAA加入量為0.5～1.5mg/L、6-BA加入量為0.2～0.8mg/L、GA3加入量為0.5～1.5mg/L；

步驟六，選取生長狀態(tài)良好的光葉蕨苗，采用含有NAA的1/2MS培養(yǎng)基，于24±1℃、2000～2100lx條件下，光照8～10h/d，培養(yǎng)至生根；NAA的加入量為0～0.5mg/L；

步驟七，在生根培養(yǎng)40d后，對光葉蕨苗進行閉罐煉苗15～20d，遮陰度為50％，再開罐煉苗3～7d；將光葉蕨苗移出，消毒滅菌，移栽至經(jīng)消毒處理的基質(zhì)中，澆足定根水，每5d噴施一次營養(yǎng)液；其中，基質(zhì)為草炭、珍珠巖和蛭石的混合物，草炭、珍珠巖和蛭石重量比為1～2:0.5～1:0.5～1。

2.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟三1/2MS培養(yǎng)基中NAA加入量為0.05mg/L、6-BA加入量為0.1mg/L。

3.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟四1/2MS培養(yǎng)基中NAA加入量為1.0mg/L、6-BA加入量為1.0mg/L、GA3加入量為2.0mg/L。

4.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟五用于壯苗培育的1/2MS培養(yǎng)基中NAA加入量為1.0mg/L、6-BA加入量為0.5mg/L、GA3加入量為1.0mg/L。

5.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟六用于生根培育的1/2MS培養(yǎng)基中NAA的加入量為0.1mg/L。

6.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟七基質(zhì)中草炭、珍珠巖和蛭石的體積比為2:1:1。

7.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟七基質(zhì)的消毒過程如下：將基質(zhì)置于0.1MPa的滅菌鍋中，保持20～30min；或者采用5％的福爾馬林或0.3％的硫酸銅溶液淋透基質(zhì)，塑料布覆蓋7d。

8.如權(quán)利要求1所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟七光葉蕨苗的消毒過程如下：采用500倍多靈菌溶液清洗光葉蕨苗2～3次。

9.一種利用如權(quán)利要求1～8任意一項所述的光葉蕨孢子體繁殖的培養(yǎng)方法培養(yǎng)的光葉蕨。