[發(fā)明專利]L-脯氨酰胺的液相色譜分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711421154.8
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN108226329A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設計）人: 包策;應燕飛;王臻;朱國榮;屠勇軍
• 申請（專利權）人: 浙江天宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;C07D207/16
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;王惠

本發(fā)明提供了一種L?脯氨酰胺的液相色譜分析方法，包括以下步驟：分別精密量取L?脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生試劑溶液，渦旋混勻，反應一定時間，再加入二乙胺乙醇溶液，渦旋混勻，反應一定時間，再加入三氟乙酸乙醇溶液，渦旋混勻，得到L?脯氨酰胺衍生物溶液；將所述L?脯氨酰胺衍生物溶液進行色譜分析。本發(fā)明的液相色譜分析方法能夠準確靈敏地檢測L?脯氨酰胺和D?脯氨酰胺。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及一種L-脯氨酰胺的液相色譜分析方法。

背景技術

L-脯氨酰胺是合成維格列汀(Vildagliptin)的重要手性中間體，其對映異構體D-脯氨酰胺通常存在于市售的L-脯氨酰胺產(chǎn)品中，兩者的結構式分別如下：

L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的紫外吸收均較弱，常規(guī)的帶紫外檢測器的高效液相色譜儀(HPLC)無法靈敏地檢測L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量，存在樣品不易被檢測的問題。因此，有必要研究能夠準確靈敏地檢測L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量的分析方法，以便能夠在后續(xù)的維格列汀合成工藝中有效控制手性異構體的含量。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述問題，本發(fā)明提供了一種靈敏、高效的L-脯氨酰胺的液相色譜分析方法，所述方法包括以下步驟：

1)分別精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生試劑溶液，渦旋混勻，反應一定時間，再加入二乙胺乙醇溶液，渦旋混勻，反應一定時間，再加入三氟乙酸乙醇溶液，渦旋混勻，即得L-脯氨酰胺衍生物溶液；

2)將L-脯氨酰胺衍生物溶液進行色譜分析。

在一個實施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生試劑溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通過如下步驟來制備：

將L-脯氨酰胺溶解于稀釋液中以制備L-脯氨酰胺溶液；

將衍生試劑溶解于乙腈中以制備衍生試劑溶液；

將三乙胺溶解于乙醇中以制備三乙胺乙醇溶液；

將二乙胺溶解于乙醇中以制備二乙胺乙醇溶液；

將三氟乙酸溶解于乙醇中以制備三氟乙酸乙醇溶液。

在一個實施方案中，進行上述色譜分析的色譜儀器及條件為：

檢測儀器：高效液相色譜儀，配備紫外檢測器；

色譜條件：

色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IC 4.6×250mm,5um；流動相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))；檢測波長：262nm；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；進樣體積：10μL；樣品盤溫控：15℃；運行時間：30min；稀釋液：0.1％的三氟醋酸/乙醇混合液。

在一個實施方案中，所述衍生試劑選自芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)，其結構式如下：

進一步地，所述衍生試劑FMOC-Cl與L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺反應制備其對應的衍生物的原理如下：

另一方面，本發(fā)明還提供了衍生試劑用于L-脯氨酰胺的液相色譜分析的用途。

在一個實施方案中，所述衍生試劑選自芴甲氧羰酰氯。

另一方面，本發(fā)明還提供了L-脯氨酰胺衍生物，其具有如下結構：

又一方面，本發(fā)明還提供了化合物的制備方法，包括以下步驟：