[發明專利]一種檢測和鑒別塞尼卡谷病毒、口蹄疫病毒O、A和Asial型的試劑盒及引物和探針

有效

• 申請號: 201711420252.X
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN110205405B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 鄭海學;曹偉軍;楊帆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 蘭州智和專利代理事務所(普通合伙) 62201
• 代理人: 周立新

本發明公開了一種檢測和鑒別塞尼卡谷病毒、口蹄疫病毒O、A和Asial型的試劑盒及引物和探針。用于檢測和鑒別塞尼卡谷病毒、O型口蹄疫病毒、A型口蹄疫病毒和Asial型口蹄疫病毒，其引物和探針序列為：塞尼卡谷病毒檢測引物和探針序列SEQ1、SEQ2和SEQ3；O型口蹄疫病毒檢測引物和探針序列SEQ4、SEQ5和SEQ6；A型口蹄疫病毒檢測引物和探針序列SEQ7、SEQ8和SEQ9；Asia1型口蹄疫病毒檢測引物和探針序列SEQ10、SEQ11和SEQ12。本發明的試劑盒可同時進行塞尼卡谷病毒和口蹄疫病毒O、A和Asial型的檢測和鑒別，簡化了操作步驟，縮短了檢測時間提高檢測準確度。

技術領域

本發明涉及一種可用于動物病毒檢測的特異性引物對和探針，以及包括有特異性引物對和探針的定量檢測試劑盒，確切講本發明是一種能同時檢測和鑒別塞尼卡谷病毒、口蹄疫病毒O、A和Asial型一步法TapMan實時熒光定量PCR檢測試劑盒。

背景技術

塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)為單股正鏈的不分節段的RNA病毒，為小RNA病毒科(Picornaviridae)塞尼卡谷病毒屬的唯一成員。2015年9月以來，美洲國家多個地區的豬群發生水泡性疫情，感染豬跛行，冠狀帶和蹄壁周圍發紅發燙，并出現潰瘍性病變，豬的鼻吻，蹄冠狀帶部為出現水泡樣病變，經過實驗室病原鑒定，排除為口蹄疫、豬水皰病和水泡性口炎等重要外來動物疫病，最終被確診為塞尼卡谷病毒感染。2015年夏天在我國廣東省出現該病毒的首例報道，后續在2016年4月湖北省也出現了該病毒的爆發，主要臨床癥狀為豬鼻吻、蹄部出現水泡樣病變，雖然塞尼卡谷病毒不會引起重大的經濟損失，但由于其感染后表現出的臨床癥狀與口蹄疫難以區分，所以急需建立一種快速，敏感和特異的區分塞尼卡谷和口蹄疫的鑒別診斷方法，對該病的控制至關重要。

目前沒有同時鑒別檢測塞尼卡谷病毒和口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Diseasevirus,FMDV)O、A和Asial的多重實時熒光定量檢測技術的報道，使用本試劑盒進行RealTime RT-PCR反應可在同一反應管內連續進行塞尼卡谷病毒和口蹄疫病毒O、A和Asial型檢測，操作簡單，敏感性高，并能有效防止污染。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種特異、敏感、快速和便捷的可用于鑒別檢測塞尼卡谷病毒和口蹄疫病毒O、A和Asial型的特異性引物對及探針的檢測試劑盒。

本發明通過以下技術手段解決上述技術問題：

本發明是一種用于能同時鑒別檢測塞尼卡谷病毒和口蹄疫病毒O、A和Asial型的引物對及探針基因序列分別為：

塞尼卡谷病毒檢測引物和探針：

SEQ1：(SVV-F)5’-AGAATTTGGAAGCCATGCTCT-3’

SEQ2：(SVV-R)5’-GAGCCAACATAGARACAGATTGC-3’

SEQ3：(SVV-Probe)5’-TTCAAACCAGGAACACTACTCGAGA-3’

(5′FAM,3′BHQ1)

O型FMDV檢測引物和探針：

SEQ4：(O/FMDV-F)5’-GAAGCAGCCTTGGACAACACC-3’

SEQ5：(O/FMDV-R)5’-GTGTGGTGCCGTGTAGGGCA-3’

SEQ6：(O/FMDV-Probe)5’-CACCAACCCAACGGCGTAYCAYAAGGC-3’

(5′ROX,3′BHQ1)

A型FMDV檢測引物和探針：