[發明專利]一種黃精葉片的離體再生培養方法

在審

• 申請號: 201711409881.2
• 申請日: 2017-12-23
• 公開（公告）號: CN107896994A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 張金渝;鄧清;楊維澤;楊紹兵;曾祥飛;鄧先能;左應梅;楊天梅;楊美權;李紀潮;尹進超;趙露琴
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院藥用植物研究所;云南澈川生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明科陽知識產權代理事務所53111
• 代理人: 徐洪剛

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體來一種黃精葉片的離體再生培養方法。

背景技術

黃精系百合科黃精屬多年生草本植物滇黃精（P. kingianum Coll. et Hemsl）、黃精（Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根莖，為名貴中藥，具有寬中益氣、益腎填精、滋陰潤肺、生津補脾之功效。主治肺燥干咳、體虛乏力、心悸氣短、久病津虧口干、糖尿病、高血壓等病癥。對治療心血管疾病、結核病、慢性肝炎以及在抗菌、解毒、抗疲勞、抗衰老、降血糖、降血脂、抗腫瘤等方面均有較好的作用。

黃精既可入藥，又可作為保健食品，是延年益壽的佳品，在食品領域具有很大的發展前景，其需求量越來越大，野生黃精的數量遠不能滿足市場需求，人工種植已成為黃精發展的一個主要內容。在自然條件下，黃精靠種子和根莖進行繁殖，由于種子不易采收，發芽率低，根莖繁殖成本高，于是植物組培技術在黃精規模化育苗方面有了很好的應用。

目前，在黃精組織培養領域公開了許多專利，大多集中于以黃精根莖和種子為外植體的誘導方法，所采用激素包括6-BA、TDZ、2,4-D、NAA和IAA等，為黃精組培苗的生產提供了很多依據。但是不管是采用種子或者根莖等繁殖的方法，均存在周期長，成本高等問題。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術存在的問題，提供一種黃精葉片的離體再生培養方法，利用葉片作為材料實現黃精的快繁繁殖。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種黃精葉片的離體再生培養方法，步驟包括：

（1）外植體選擇：選擇組培中處于增殖階段的叢苗，挑選長條形大苗或細針形小芽為培養材料；

（2）不定芽誘導：將步驟（1）選擇的外植體材料的葉片從基部切下，接入不定芽培養基，接種時葉片橫放，使基部切口的一半接入培養基中，另一半露在培養基外面，培養30-60天；

所述不定芽培養基為：MS、CPPU 0.5-4 mg/L、2,4-D 0-1 mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂4.5 g/L，pH為5.8；

（3）叢生芽增殖：將上一步誘導的不定芽進行切分，單個接入增殖培養基中，培養30-35天；

所述增殖培養基為：MS、CPPU 0-2 mg/L、2,4-D 0-0.5 mg/L、蔗糖30 g/L 、瓊脂4.5g/L，pH為5.8；

（4）生根培養：將增殖的叢芽2-3個為一組切下，接種至生根培養基，進行生根培養13-15天；

所述生根培養基為：1/2MS、NAA 0-1 mg/L、IBA 0-1 mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂4.5g/L，pH為5.8；

（5）煉苗移栽：待組培苗根長2-4 cm，根數3-6根時，將瓶子放置在煉苗棚中培養1周后打開瓶蓋，適量噴水培養3天后移栽至煉苗基質中。

進一步的，步驟（1）中，選擇的外植體為長條形大苗。

進一步的，步驟（2）中，不定芽培養時，培養條件為溫度23±1℃、空氣相對濕度50%-60%、光照強度2000Lx，光照時間12小時/天。

進一步的，步驟（3）中，叢生芽培養時，培養條件為溫度23±1℃、空氣相對濕度50%-60%、光照強度2000Lx，光照時間12小時/天。

進一步的，步驟（4）中，生根培養時，培養條件為溫度23±1℃、空氣相對濕度50%-60%、光照強度2000Lx，光照時間12小時/天。

進一步的，步驟（5）中，所述煉苗基質為泥炭土、珍珠巖或蛭石和細沙，其重量比為5:3:2。

本發明的有益技術效果是：在本發明的技術方案中，外植體選用組培中處于增殖階段的長條形大苗或細針形小芽為外植體，通過配制全新培養基，可快速實現黃精的繁殖，可重復性高，取材易得，操作簡便，繁殖效率高，大大突破了黃精組培中再生材料單一用根莖及頂芽繁殖的瓶頸問題，可從根本上解決黃精種質退化及常規繁育中周期長、繁殖率低等問題，培養出來的不定芽數目多、質量好、健壯、沒有畸形，為滿足市場需求、緩解生態壓力及工廠化、規范化苗木生產奠定基礎。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。