[發明專利]一種泥鰍面膜用的精華液

在審

• 申請號: 201711409681.7
• 申請日: 2017-12-23
• 公開（公告）號: CN107929209A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 卞國民
• 申請（專利權）人: 卞國民
• 主分類號: A61K8/98
• 分類號: A61K8/98;A61K8/73;A61K8/64;A61Q19/02;A61Q19/08;A61Q19/00;A61Q17/00;C08B37/08;C08B37/00
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1.一種泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，是由下列重量份的原料制備而成：

2.根據權利要求1所述的泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，是由下列重量份的原料制備而成：

3.根據權利要求1所述的泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，是由下列重量份的原料制備而成：

4.根據權利要求1所述的泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，是由下列重量份的原料制備而成：

5.根據權利要求1-4中任一項所述的泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，所述的泥鰍多糖是由以下步驟制備而成：

⑴、清腸：

用水和郁李仁按4-6:1的重量比例熬水，先猛火后文火熬至液體體積降為50％時取濾液，再按1kg濾液加入8000毫克維生素C，配置成清腸原液；再將水與清腸原液按40-60:1的重量比例配制成清腸液，然后，將清腸液加入到泥鰍暫養清洗池中，經過2-5h的清腸，撈出經過清腸的泥鰍；

⑵、粘液收集：

把經過清腸的泥鰍倒入篩筐中，篩筐下放置收集液體的容器，泥鰍相疊厚度為25-35㎝，用噴霧器將體積濃度為20-40％的酒精按0.3-0.7ml/min·㎝²的比例噴灑于筐中泥鰍體上，間隔8-12min噴相等量的水；每30min重復一次，持續120min；收集容器中的粘液溶液；

⑶、粘液濃縮：

將收集到的粘液溶液用濾布過濾，去掉雜質，再用80℃以下蒸餾濃縮手段，去掉60％的水分，得粘液濃縮液；

⑷、提純：將粘液濃縮液按1：4的重量比例加入無水乙醇，搖均后靜置4小時，再用高速離心機離心，倒出上清液，得沉淀一；再將上清液用無水乙醇處理2次，抽濾，得沉淀二；將沉淀一和沉淀二合并，用無水乙醇洗兩次，得醇洗沉淀；再將醇洗沉淀用氯仿萃取2次，得濾渣，然后，將濾渣在60℃下真空干燥，即得泥鰍多糖。

6.根據權利要求5所述的泥鰍面膜用的精華液，其特征在于，所述的透明質酸鈉(HA)是由以下步驟制備而成：

⑴、培養基制備：

將泥鰍清洗干凈，加熱到80-85℃，保溫30-40min取出，再用蒸餾水洗凈并處理成泥鰍碎料；再將泥鰍碎料與蒸餾水按1g：2.2-2.8ml的比例混合成泥鰍混合碎料，然后將泥鰍混合碎料置于水浴中，加溫到40-50℃，保溫2h；接著冷卻到38-40℃，再用1mol/L的鹽酸調節pH值至2.0-2.1，再按25-35g/kg的比例加入胃蛋白酶，保溫反應2h；再加熱到42-48℃，用2mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH值至8.5，然后，按2.5-3.5g/kg的比例加入胰蛋白酶，保溫反應2-2.5h；然后加熱到60℃，保持8-12min，然后降溫至45℃以下，濾除殘渣，收集濾液；再向濾液中加入占其重量0.1％的葡萄糖，用lmol/L的鹽酸調節pH值至7.0，即為培養基；

⑵、菌體培養：

將獸疫鏈球菌菌種2環裝入50ml三角瓶中，搖均，在36℃恒溫條件下培養15-20h，然后，接入裝有培養基的玻璃缸中，接種量為8-12％，搖均，在36℃恒溫條件下培養18-22h；再用15瓦的紫外線燈、照射距離30厘米，放入磁力自動攪拌棒，邊攪拌邊照射30min，得菌體液；再將由1mg亞硝基胍(NTG)加入到0.1mol/L、pH值6.0的磷酸緩沖液1ml中配成的溶液：4ml菌體液的比例混合在一起，充分搖均，立即置于37℃水浴震蕩處理30min，然后離心，去掉上清液，收集菌體，再用蒸餾水洗滌菌體3次，得菌體；再將菌體：重量濃度為0.1％的葡萄糖溶液按1g:1000ml的比例稀釋，然后，接種到裝有培養基的發酵罐中，接種量為0.5-1.5％，控制pH值為6.8，發酵時間為30-40h，供氧分段控制，0～24h供氧為0.3-0.7L/min，24h后供氧為1.2-1.8L/min，溫度控制在36℃；同時，每隔8h向發酵罐內添加占發酵罐內液體總重量的1％、重量濃度為0.1％的葡萄糖溶液；發酵完成后，即為發酵液；

⑶、透明質酸鈉(HA)提取：

①、分解蛋白與殺菌：

向發酵液中加入1mol/L的鹽酸調節pH值至2.0-2.1，再按25-35g/kg的比例加入胃蛋白酶，保溫36℃反應2h；再加熱到42-48℃，用2mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH值至8.5，然后，按2.5-3.5g/kg的比例加入胰蛋白酶，保溫反應2-2.5h，得殺菌分解蛋白發酵液；

②、一次沉淀和解離：

按照8000mL/kg的比例向殺菌分解蛋白發酵液中加入蒸餾水，再加入2％(w/v)硅藻土過濾，取澄清濾液；再按15g/kg的比例向澄清濾液中加入氯代十六烷基吡啶(CPC)，攪拌30min以上，靜置、沉淀，用絹絲收集沉淀；再向沉淀中按照5000-10000ml/kg的比例加入解離液，攪拌至完全解離，得沉淀解離液；再向沉淀解離液中加入2％(W/v)硅藻土，過濾，取澄清的一次沉淀解離液；

③、二次沉淀和解離：

按照10g/kg的比例向一次沉淀解離液中攪拌加入CPC，再加2倍量無熱原蒸餾水，攪拌30min以上，放置、沉淀，得二次沉淀；再按照4000mL/kg的比例向二次沉淀中加入解離液，攪拌至完全解離，得二次沉淀解離液；

④、三次沉淀和解離：

按照10g/kg的比例向二次沉淀解離液中攪拌加入CPC，再加2倍量無熱原蒸餾水，攪拌30min以上，放置、沉淀，得三次沉淀；再按照3000mL/kg的比例向三次沉淀中加入解離液，攪拌至完全解離，得三次沉淀解離液；

⑤、提取：

向三次沉淀解離液中加2倍體積、體積濃度為95％的乙醇，邊加邊攪拌30min，靜置，收集白色沉淀，再用無水乙醇脫水3次，干燥，即得透明質酸鈉(HA)。