[發明專利]用于預測心源性猝死易感性的試劑盒

有效

• 申請號: 201711408648.2
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN107858423B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 高玉振;何艷;李立娟;張晴;尹志霞;周瑋;鄒燕
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 馮瑞;楊慧林

1.引物組在制備預測心源性猝死易感性的試劑盒中的應用，所述引物組由用于檢測COL1A2基因上rs3917號插入/缺失多態性位點的特異性引物對、MIR155HG基因上rs72014506號插入/缺失多態性位點的特異性引物對、CTH基因上rs113044851號插入/缺失多態性位點的特異性引物對和DSG2基因上rs397729601號插入/缺失多態性位點的特異性引物對組成；其中

所述COL1A2基因上rs3917號插入/缺失多態性位點的特異性引物對以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4或SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的序列分別作為有義引物和反義引物；

所述MIR155HG基因上rs72014506號插入/缺失多態性位點的特異性引物對以SEQ IDNo.7和SEQ ID No.8、SEQ ID No.9和SEQ ID No.10或SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示的序列分別作為有義引物和反義引物；

所述CTH基因上rs113044851號插入/缺失多態性位點的特異性引物對以SEQ ID No.13和SEQ ID No.14、SEQ ID No.15和SEQ ID No.16或SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示的序列分別作為有義引物和反義引物；

所述DSG2基因上rs397729601號插入/缺失多態性位點的特異性引物對以SEQ IDNo.19和SEQ ID No.20、SEQ ID No.21和SEQ ID No.22或SEQ ID No.23和SEQ ID No.24所示的序列分別作為有義引物和反義引物。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：各特異性引物對的5’端標記有熒光染料。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：各特異性引物對的濃度為0.2~1.0μM。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述試劑盒還包括1 U/μL ~ 2.5U/μL耐熱DNA聚合酶。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述試劑盒還包括2.5mM~10mM脫氧核糖核苷三磷酸混合液和25 mM~50mM鎂鹽水溶液。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述鎂鹽為氯化鎂或硫酸鎂。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述試劑盒還包括5×PCR或10×PCR反應緩沖液和水。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的應用，其特征在于，用于預測心源性猝死易感性的試劑盒的使用方法包括以下步驟：

（1）采集樣品并提取其基因組DNA；

（2）采用權利要求1所述的引物組PCR擴增所述基因組DNA，得到擴增產物；

（3）對所述擴增產物進行分離，進行插入/缺失基因型分析。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，在步驟（2）中的PCR擴增體系為：1μl DNA模板；200μM特異性引物對，有義、反義引物各0.01μl；2.5U/μlTaq DNA聚合酶0.08μl；2.5mMdNTP混合液0.2μl；25 mM鎂鹽水溶液0.6μl；10×PCR反應緩沖液1μl；去離子水補足至10μl。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，在步驟（2）中的PCR擴增條件為：94℃預變性3 min；94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，30個PCR循環；最后72℃延伸5min。