[發明專利]一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法及其系統

有效

• 申請號: 201711407814.7
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108018263B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 陳宏;趙海源;曾顯營;陳化蘭;李金祥;田國彬;馮玉強;李莉;朱長動;王玉紅;蔣曉梅;張天舒;王博;孫佰強;崔凱;趙博;劉金偉;曾曉敏;王仁君
• 申請（專利權）人: 吉林冠界生物技術有限公司;中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;C12M1/12
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

本發明涉及病毒純化濃縮領域，特別涉及一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法及其系統。一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法，包括以下步驟：預處理的重組禽流感病毒經離心，去除大顆粒物質和細胞碎片，得到清液；清液使用中空纖維微濾系統處理，得到透過液；透過液使用膜包超濾濃縮系統處理，收集循環液，濃縮，即得。本發明提供的純化濃縮方法，先經高速離心去除細胞碎片和大顆粒物質，中空纖維微濾系統純化澄清去除小顆粒蛋白，然后經膜包超濾濃縮系統進行濃縮，得到純化濃縮的重組禽流感病毒。整個過程簡單易行，并有效降低病毒中的雜質含量和雜蛋白含量，病毒中雜蛋白含量去除90％以上；在濃縮后病毒效價明顯提升。

技術領域

本發明涉及病毒純化濃縮領域，具體而言，涉及一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法及其系統。

背景技術

現有的重組禽流感疫苗主要采用雞胚工藝進行抗原生產。在禽流感胚毒疫苗生產過程中，由于尿囊液中大量雜蛋白、內毒素、尿酸鹽等使得抗原質量不穩定，疫苗使用中雞體出現應激反應、局部潰爛、死亡等免疫副反應。特別是雜蛋白質和內毒素，不但干擾疫苗免疫抗體的產生，而且大大削減了單位抗原劑量的免疫效果，同時臨床上因疫苗質量等造成的免疫失敗、動物死亡的情況屢見不鮮。另外，抗原中過多的雜質使得抗原滅活中消耗大量滅活劑，造成滅活劑、防腐劑超標、殘留，危害人類食品安全。

隨著我國加入WTO，國際上對畜禽生產、動物性食品安全標準更進一步標準化，用藥安全性、風險性的評估已成為畜禽生產主要控制指標。目前各生產廠家也在進行抗原濃縮等積極的純化方法，但就從生產工藝上完全去除雜蛋白質、內毒素等還沒有實際應用。在實驗室中小批量的抗原純化主要是以離心、離子交換處理等手段對病毒顆粒和相關性抗原進行純化。在實際生產中提高抗原純度，減少疫苗副反應是禽流感疫苗生產、使用過程中迫在眉睫的問題。

目前純化禽流感病毒的方法主要有超濾法、親和層析法和超速離心法。其中超速離心法是被廣大研究者所普遍采用的方法。此外，PEG也有報道被用來純化病毒。

現有技術在選用層析方法中填料的種類選擇復雜，而且價格比較昂貴，增加疫苗生產成本。并且雞胚工藝生產的病毒中雜質數量和種類較多，后期的濃縮階段對前期粗純和中純過程要求高，然而超速離心機只能去除細胞碎片等大顆粒物質，并不能很好的達到純度要求。因此，現有的傳統純化濃縮方法還有很多的不足之處，雜質去除效果有限，導致疫苗純度低、安全性差、副作用大。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法，以解決雜質去除難，導致疫苗純度低、安全性差、副作用大等技術瓶頸。

本發明的第二目的在于提供一種重組禽流感病毒的純化濃縮系統，純化濃縮全程為管道化，安全可靠，更好滿足密閉無菌要求，工藝簡單，重復性好，易于生產工藝放大。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法，包括以下步驟：預處理的重組禽流感病毒經離心，去除大顆粒物質和細胞碎片，得到清液；

所述清液使用中空纖維微濾系統處理，得到透過液；

所述透過液使用膜包超濾濃縮系統處理，收集循環液，濃縮，即得。

本發明提供的一種重組禽流感病毒的純化濃縮方法，預處理的重組禽流感病毒經高速離心去除剩下的細胞碎片和大顆粒物質，中空纖維微濾系統純化澄清去除小顆粒蛋白，然后經膜包超濾濃縮系統進行濃縮，得到純化濃縮的重組禽流感病毒。整個過程簡單易行，并有效降低病毒中的雜質含量和雜蛋白含量，病毒中雜蛋白含量去除90％以上；在濃縮后病毒保持較高的效價。

進一步地，所述預處理為：低溫靜置沉淀，然后抽取上清液。此過程可以去除大部分的細胞碎片。

優選地，所述離心采用離心機進行。