[發明專利]一種用于診斷評估乳腺癌的試劑盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的檢測及其應用

有效

• 申請號: 201711406093.8
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN107988366B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 李少英
• 申請（專利權）人: 深圳市寶安區婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京睿派知識產權代理事務所(普通合伙) 11597
• 代理人: 劉鋒;邸巖

本發明涉及一種用于診斷評估乳腺癌的試劑盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的檢測及其應用，更具體的涉及HOXA4/DPP6基因、HOXA4/DPP6基因的甲基化檢測及其在制備乳腺癌診斷、檢測和篩查藥物中的應用以及用于上述用途的試劑盒。本發明研究發現HOXA4/DPP6基因在乳腺癌患者腫瘤組織中甲基化程度明顯高于腫瘤組織旁邊的正常組織，而且甲基化水平同腫瘤進展密切相關，本發明提供了一種新的乳腺癌診治靶點，并給出了針對其的試劑盒，其是檢測乳腺癌進展以及在人群篩查和乳腺癌診斷的一種新方法，具有重要的臨床應用價值。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及甲基化HOXA4/DPP6基因及其應用，更具體的涉及一種用于診斷評估乳腺癌的試劑盒、HOXA4/ DPP6基因、HOXA4/DPP6基因的甲基化檢測及其在乳腺癌中的應用。

背景技術

全球腫瘤流行病統計數據(GLOBOCAN)認為乳腺癌是中國女性最常見的癌癥，年齡標化率(ASR)為每10萬人21.6例。據赫捷院士發表的《Cancer Statistics in China,2015》數據，在我國乳腺癌居女性腫瘤發病率第一位，2015年新增病例為27.2萬，城市新發女性乳腺癌占 19.0萬。根據中國國家腫瘤登記中心的數據，城市地區的ASR(34.3例 /10萬女性)是農村地區的2倍(17.0例/10萬女性)。社會經濟發達的沿海城市發病率最高，廣州乳腺癌ASR為46.6例/10萬女性。在中國，診斷為乳腺癌的平均年齡為45-55歲，比西方女性更加年輕。全球乳腺癌年平均增幅達3.1％，我國各地區1988-2007年間乳腺癌發病率增長 1.2-2.8倍，隨著我國人口老齡化進程的加快，女性壽命明顯高于男性的普遍規律，今后我國老年女性人口的數量將持續增長；加上我國獨特生育模式的影響，預計未來我國乳腺癌發病率和死亡率快速上升的趨勢仍將長期持續，嚴重威脅我國女性健康。隨著不斷攀升的發病率和死亡率，乳腺癌的早防早治已成為當今醫學界所面臨的重大難題。

目前我國尚無一套成熟的女性乳腺癌篩查方案，《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2013版)》的推薦方案仍參照ACS指南。但由于我國女性乳腺癌發病年齡高峰早于美國，我國建議乳房鉬靶X線攝影術 (MAM)篩查起始年齡早于美國5年，且由于亞洲女性乳腺質地、體積和經濟情況的差異，無放射性的乳腺超聲成為我國乳腺癌的重要篩查方法。目前臨床上的快速輔助診斷手段是鉬靶X光片檢測，微鈣化點群是重要的早期影像學征兆。然而微鈣化點非常微小，混雜于大量圖像背景中，導致肉眼識別困難，對醫生的經驗要求很高。因而近年來人們逐漸重視鉬鈀影像的計算機輔助診斷技術。但由于高分辨率圖像巨大，個體差異較大，因而盡管近年來的圖像和人工智能算法不斷發展，計算緩慢、準確率較低、易發生經驗主義錯誤等問題仍然制約著基于影像學的乳腺癌早期診斷。因此，分子診斷就成為非常必要的檢測手段。目前，乳腺癌的診斷及分子分型主要依靠有創的手段獲取組織標本，如穿刺活檢、手術切除病灶、術中冰凍會診樣本等，存在需要借助影像學輔助等不足，檢測成本相對較高、存在風險且無法做到對病情的實施跟蹤和監控。因此，尋找一種快速有效的乳腺癌檢測分子診斷方法具有重要的臨床意義。

DNA甲基化是最早發現的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。在現有技術中，相關的研究還十分匱乏，亟待更多的研究揭示與乳腺癌相關的甲基化基因，并闡明所述甲基化位點與乳腺癌的關系。

本發明通過長期對眾多乳腺癌患者的腫瘤組織以及腫瘤組織旁邊的正常組織進行高通量甲基化測序分析，篩選出幾個在病例組中呈高甲基化的候選基因及其甲基化位點。并通過多例試驗進行驗證，獲得了本申請的技術。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提供一種用于診斷評估乳腺癌的試劑盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的檢測及其應用，以解決現有技術中提到的不足。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：