[發明專利]一種中性粒細胞彈性蛋白酶的化學發光檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請號: 201711403097.0
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108037287A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 曹晶;劉麗青;胡雪婷;常燕;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/577;G01N21/76
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本發明公開了一種中性粒細胞彈性蛋白酶的化學發光檢測試劑盒及其制備方法。該試劑盒包括：磁微粒偶聯的中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）捕獲抗體、吖啶酯標記的中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）檢測抗體、中性粒細胞彈性蛋白酶校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B、清洗液。本發明試劑盒將化學發光技術與免疫磁微粒相結合，提供了一種接近均相的反應體系。與現有技術相比，本發明建立的直接化學發光法靈敏度高、特異性強、準確快速，檢測時間短，檢測結果具有更高的準確性與重復性，該試劑盒可適用于各種發光檢測儀器。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析領域，具體是一種中性粒細胞彈性蛋白酶的免疫化學發光檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）是一種分子量為30000、由218個氨基酸組成的單鏈糖蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶家族。它來源于中性粒細胞，在單核細胞中也有少量的存在。中性粒細胞內的彈性蛋白酶濃度超過 5mM，每個中性粒細胞含有大約 400個彈性蛋白酶陽性顆粒，估計細胞總量在 3pg 以上，并被嚴格地控制在中性粒細胞嗜苯胺藍體的顆粒內。當中性粒細胞被激活后，從嗜苯胺藍顆粒中釋放出多種蛋白水解酶，包括絲氨酸酶、彈性蛋白酶等多種蛋白酶，而彈性蛋白酶是其中含量高、作用范圍廣、水解能力強的蛋白水解酶之一。它能降解細胞外基質，并能引起內皮細胞的分離、溶解或屏障功能破壞。細胞外基質是動脈粥樣斑塊的主要成分，主要由膠原、彈性蛋白、非膠原糖蛋白及蛋白多糖等組成。它與細胞黏合在一起并交織成有序的網狀，賦予斑塊的完整性。細胞外基質的含量、厚度及強度對于防止斑塊破裂至關重要。NE除分解彈性蛋白外，還能分解連接組織的其他成分，如膠原蛋白、纖維連接蛋白。而且還能誘導細胞因子的表達，如白細胞介素-8（IL-8）、粒細胞刺激因子β、血小板生長因子和內皮素，而這些物質又能吸引和激活中性粒細胞釋放更多的NE。NE的這些多重效應構成了一個級聯(cascade)的網絡而形成惡性循環。

以上形成的惡性循環使細胞外基質過度降解，斑塊趨于不穩定，在臨床表現為不穩定性心絞痛（UAP）、急性心肌梗死（AMI）甚至猝死發生。研究發現不穩定斑塊具有纖維帽薄、脂質豐富、斑塊內炎癥反應活躍的特點，容易破裂及血栓形成，引起急性冠狀動脈綜合征（ACS）。炎癥細胞對不穩定斑塊的侵蝕可能是引起ACS的機制。及時識別不穩定斑塊，并積極治療可望減少ACS的發生。所以我們對NE的檢測具有非常重要的作用。

目前中性粒細胞彈性蛋白酶檢測的方法有：酶聯免疫法等。酶聯免疫法采用的酶為辣根過氧化物酶，采用辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發光，本底相對較高，影響信噪比，反應動力學復雜，影響因素多，結果不夠穩定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。本發明采用吖啶酯標記，具有如下優點：①背景發光低，信噪比高，發光反應干擾因素少；②閃光型發光，光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗體結合位點，提高系統整體靈敏度；④易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少；⑤標記物穩定，不受環境氧化劑的影響(在2-8℃下可保存數月之久)。因此吖啶取代物是一類非常有效的化學發光標記物。

本發明采用的方法為化學發光法，其優點為：靈敏度高、特異性強、準確快速、檢測時間短、線性范圍寬，檢測結果具有更高的準確性與重復性。

發明內容

本發明提供了一種具有較高靈敏度和特異性的檢測中性粒細胞彈性蛋白酶的試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種中性粒細胞彈性蛋白酶的化學發光檢測試劑盒及制備方法，本發明所提供的化學發光法檢測中性粒細胞彈性蛋白酶的試劑盒，采取磁微粒偶聯中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）捕獲抗體，吖啶酯標記中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）檢測抗體。試劑盒還包括中性粒細胞彈性蛋白酶校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。