[發明專利]一種艱難梭菌毒素A的化學發光檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711403077.3
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108072645A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 劉麗青;曹晶;常燕;胡雪婷;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種艱難梭菌毒素A化學發光檢測試劑盒及其制備方法。該試劑盒包括：偶聯有艱難梭菌毒素A捕獲抗體的磁微粒、吖啶酯標記的艱難梭菌毒素A檢測抗體、艱難梭菌毒素A校準品溶液、清洗液、化學發光預激發液A、化學發光激發液B。本發明試劑盒以磁分離化學發光技術為檢測手段，同時結合吖啶酯標記技術。本發明試劑盒操作簡單方便，反應條件溫和，發光值穩定，受外界條件影響少；與現有技術相比，具有靈敏度高、檢測快速方便、準確性高、重復性好、特異性強等優點。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，具體涉及一種艱難梭菌毒素A的化學發光檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

艱難梭菌最初是在1935年由Hall和O'Tolle發現，但直到1977年證實艱難梭菌與臨床上長期使用某些抗菌藥物引起的偽膜性結腸炎有關才備受關注。

艱難梭菌可產生6種毒素，包括毒素A(tcdA)、毒素B(tcdB)、毒素C(tcdC)、毒素R(tcdR)、毒素E(tcdE)和二元毒素(CDT)，分別是由tcdA、tcdB、tcdC、tcdR、tcdE和CDT基因編碼。其主要的毒力因子是毒素A(腸毒素，308 kD)和毒素B(細胞毒素，270 kD)，它們均屬于大梭菌毒素家族成員(LCTs)，且結構相似，約有48%氨基酸序列一致。艱難梭菌在腸道黏附繁殖產生毒素，其次毒素對腸道黏膜發揮病理作用。正常腸道菌群具有定植抗力可以抵御病原體黏附。但長期使用抗菌藥物，定植抗力減弱，腸道微生物群以及代謝群均發生變化，導致腸道菌群失調，艱難梭菌易于黏附在腸道并釋放毒素。

目前用于檢測艱難梭菌毒素A的方法主要有細胞培養法、膠乳凝集試驗、膠體金免疫分析法、酶聯免疫分析法等。其中，產毒素細胞培養是檢測艱難梭菌毒素產生情況，并具有較高的敏感性和特異性，但是因細胞培養技術難度較高，測定時間長，故在常規臨床微生物實驗室無法普及；乳膠凝集試驗用艱難梭菌抗毒素與乳膠微粒交聯，然后用抗原抗體結合產生的免疫沉淀來檢測毒素，該法假陽性較高，且也存在假陰性，臨床使用有一定缺點；CN 101363867A（2009.02）公開了一種艱難梭菌A、B毒素膠體金檢測試紙條、其制備方法及其應用，該方法采用膠體金標記艱難梭菌毒素A、B抗體，膠體金方法的檢測是以肉眼可見的顏色進行表征，存在誤差較大，操作繁瑣、流程較多、靈敏度低、精度不高等缺點；酶聯免疫分析法抗原、抗體是在固相（ELISA板反應孔）表面進行結合反應，存在靈敏度低、不易實現全自動化、檢測時間長等的缺點。因此，建立一種有效、快速、簡單、靈敏、抗干擾性高的檢測艱難梭菌毒素A的方法具有十分重要的意義。

本發明以磁分離化學發光技術為檢測手段，同時結合吖啶酯標記技術進行檢測。

吖啶取代物作為化學發光標記物用于免疫分析具有許多優越性，主要有：①化學反應簡單、快速、無需催化劑，在有H2O2的稀堿性溶液中即能發光；②背景發光低，信噪比高，發光反應干擾因素少；③發光類型為閃光型發光，光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大；④吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗體結合位點，可提高系統整體靈敏度；⑤易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少；⑥標記物穩定，不受環境氧化劑的影響，在2-8℃下可保存數月之久。因此吖啶取代物是一類非常有效的化學發光標記物。

磁分離免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體而建立的一種新型免疫檢測方法，該方法可使抗原、抗體的結合反應在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種操作簡便、靈敏度更高、反應快速、穩定、準確地定量測定艱難梭菌毒素A的磁微粒化學發光測定試劑盒及制備方法。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：