[發明專利]一種瘦素的化學發光檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711403057.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108051600A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 常燕;胡雪婷;曹晶;劉麗青;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種瘦素的化學發光檢測試劑盒及其制備方法。該試劑盒包括：偶聯有瘦素捕獲抗體的磁微粒、吖啶酯標記的瘦素檢測抗體、瘦素校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。本發明試劑盒以磁分離化學發光技術為檢測手段，同時結合吖啶酯標記技術。本發明建立的直接化學發光法靈敏度高、特異性強、準確快速，檢測時間短，檢測結果具有更高的準確性與重復性，該試劑盒可適用于各種發光檢測儀器。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，具體是一種瘦素的化學發光檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

瘦素是由ob基因所編碼的含有167個氨基酸殘基的蛋白質。分泌到血漿中的瘦素是在神經末端信號肽中除去21個氨基酸殘基后，由146個氨基酸殘基所組成的蛋白質，分子量約16kD，具有較強的親水性。在血漿中絕大部分（約80％）與血漿蛋白質結合，少部分以游離形式存在，發揮生物效應。血漿中的瘦素水平與脂肪組織中ob mRNA的量、體重指數、性別和體脂百分含量呈顯著正相關。

目前的研究表明，瘦素具有較廣泛的生物學效應，其中較重要的是作用于下丘腦體重調節中樞引起食欲降低，減少能量的攝取，同時通過代謝率增加而

增加能量的消耗及抑制脂肪的合成，減少脂肪的堆積而使體重減輕。進一步研究表明，瘦素與下丘腦的瘦素受體結合后在中樞水平與有刺激食欲作用的增食欲素、神經Y肽（刺激食欲的作用強度稍大于增食欲素）及黑皮質素（抑制食欲）等共同作用凋節食欲及能量平衡。另一方面，瘦素受體的廣泛分布，提示瘦素又可能是一種多靶器官，多功能的激素。現發現瘦素至少與下列功能和現象有關：調節糖、脂代謝，抑制胰島素的分泌，對生殖功能的促進作用，表現為青春期及妊娠期瘦素濃度升高，甲狀腺功能、骨代謝、肝臟代謝等。

到目前為止，用于檢測瘦素的方法主要有：放射免疫法、酶聯免疫法（ELISA）以及酶促化學發光法。放射免疫法由于碘標示蹤劑存在固有半衰期，造成了試劑的有效期短，且放免法對設備的要求特殊，使它在一般實驗室開展受到限制。酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測技術是利用抗原-抗體之間特異性的免疫反應識別生物液體中的靶分子，并利用酶-底物的顯色反應定量的反應待測樣本中靶分子的含量。該方法雖然檢測價格低廉、快速，但是酶標法本身受固相反應的制約，酶標顯色的穩定性也易受溫度和酸堿度變化的影響，所用底物大部分為有毒物質或致癌物，且其靈敏度也不夠，只適用于微量物質的檢測和鑒定，已經不能滿足大型醫院快速定量檢測的要求。CN 102901823 A（2013年1月）公開了一種酶聯定量檢測瘦素的試劑盒，該試劑盒將重組人瘦素多肽單克隆抗體作為包被抗體微孔板，加待測血清樣品，再加相應的酶標抗體以測定待測血清樣品的吸光值，其主要的主要缺點是靈敏度低，檢測準確性低，成本昂貴。而酶促化學發光法是以酶標記抗原或抗體進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物，在信號試劑作用下發光，用發光信號測定儀進行發光測定，目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP)。CN106405117A（2016年8月）申請了一種檢測瘦素抗原的板式磁性微粒子化學發光分析試劑盒，該試劑盒采用高特異性的單克隆抗體及包被抗異硫氰酸熒光素抗體的磁性微粒子固相分離技術，利用異硫氰酸熒光素和辣根過氧化物酶分別標記一株單克隆抗體和一株多克隆抗體，在液相中形成免疫夾心復合物，然后加入包被FITC抗體的磁性微粒子分離劑，進行洗滌分離，并在板式化學發光儀中進行測定。采用辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發光，本底相對較高，影響信噪比，反應動力學復雜，影響因素多，結果不夠穩定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。因此，建立一種有效、快速、簡單、靈敏、抗干擾性高的檢測瘦素的方法具有十分重要的意義。