[發明專利]一種E-選擇素的化學發光檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711402933.3
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108089010A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 曹晶;劉麗青;胡雪婷;常燕;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種E?選擇素的化學發光檢測試劑盒及其制備方法。該試劑盒包括：磁微粒偶聯的E?選擇素（Es）捕獲抗體、吖啶酯標記的E?選擇素（Es）檢測抗體、E?選擇素校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B、清洗液。本發明試劑盒將化學發光技術與免疫磁微粒相結合，提供了一種接近均相的反應體系。與現有技術相比，本發明建立的直接化學發光法靈敏度高、特異性強、準確快速，檢測時間短，檢測結果具有更高的準確性與重復性，該試劑盒可適用于各種發光檢測儀器。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析領域，具體是一種E-選擇素的免疫化學發光檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

E-選擇素（Es）被稱為“內皮細胞白細胞黏附分子”（EL-AM-1），現已被統一命名為Es或CD62E。Es與選擇素家族的其他成員相同，是一型單鏈糖蛋白，相對分子質量為115x103，由一系列蛋白區域片段構成，其中包括氨基末端C型植物凝集素（leotin）因子樣片段、一個表皮生長因子（EGF）樣片段、6個較短共同重復序列（SCR）（或補體調節/結合蛋白重復序列，每個序列約含60個氨基酸）、單一跨膜區域和一個胞漿區。與其他選擇素相比，Es的主要結構特點為：補體調節型的多個重復序列與凝集素和EGF區城結合，每個補體調節重復片段含6個而不是4個半胱氨酸。Es凝集素區域與甘露糖結合蛋白緊密排列，C型凝集區域和EGF區域具有高度的保守性，使其在與配體結合方面有重要作用。

炎癥在冠狀動脈粥樣硬化的發生、發展中的作用越來越受到人們的重視，慢性炎性反應促進了動脈粥樣硬化的進展。與冠狀動脈粥樣硬化形成有密切關系的細胞黏附分子主要有選擇素家族、整合素家族、免疫球蛋白超家族。Es是選擇素家族的一員，是在炎癥過程中最初出現的黏附分子。Es的作用是減慢血流中的白細胞流動，使其滾動到血管內皮表面，然后使整合素家族與其配體細胞間黏附分子-1（ICAM-1）或Es結合，使白細胞緊密黏附于內皮表面，并介導白細跑的滲出，而白細胞向血管內皮的遷移黏附是動脈粥樣硬化的重要機制。冠心病患者血清可溶性Es表達增加，Es可能參與了冠心病的發病過程與冠狀動脈粥樣硬化的形成。所以我們對Es的檢測有助于判斷心絞痛患者及冠狀動脈中斑塊的穩定性。

目前E-選擇素檢測的方法有：酶聯免疫法等。酶聯免疫法采用的酶為辣根過氧化物酶，采用辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發光，本底相對較高，影響信噪比，反應動力學復雜，影響因素多，結果不夠穩定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。本發明采用吖啶酯標記，具有如下優點：①背景發光低，信噪比高，發光反應干擾因素少；②閃光型發光，光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗體結合位點，提高系統整體靈敏度；④易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少；⑤標記物穩定，不受環境氧化劑的影響(在2-8℃下可保存數月之久)。因此吖啶取代物是一類非常有效的化學發光標記物。

本發明采用的方法為化學發光法，其優點為：靈敏度高、特異性強、準確快速、檢測時間短、線性范圍寬，檢測結果具有更高的準確性與重復性。

發明內容

本發明提供了一種具有較高靈敏度和特異性的檢測E-選擇素的試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種E-選擇素的化學發光檢測試劑盒及制備方法，本發明所提供的化學發光法檢測E-選擇素的試劑盒，采取磁微粒偶聯E-選擇素（Es）捕獲抗體，吖啶酯標記E-選擇素（Es）檢測抗體。試劑盒還包括E-選擇素校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。

作為本發明進一步的方案，所述的磁微粒可直接與E-選擇素抗體偶聯，也可將磁微粒與鏈霉親和素偶聯，同時采用生物素標記E-選擇素抗體。