[發明專利]一種利用血紅素/伴侶素人工酶檢測溶液中物質含量的應用在審
| 申請號： | 201711402603.4 | 申請日： | 2017-12-22 |
| 公開（公告）號： | CN108132240A | 公開（公告）日： | 2018-06-08 |
| 發明（設計）人： | 王小強;王超;潘美紅 | 申請（專利權）人： | 中國石油大學（華東） |
| 主分類號： | G01N21/75 | 分類號： | G01N21/75;G01N21/31 |
| 代理公司： | 青島聯信知識產權代理事務所(普通合伙) 37227 | 代理人： | 段秀瑛 |
| 地址： | 266580 山東省青島市經濟*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 人工酶 血紅素 伴侶 應用 檢測 過氧化氫反應 血清中葡萄糖 過氧化氫的 生物酶檢測 活性位點 鄰苯二胺 生物診斷 市政污水 污水監測 血紅素酶 底物 監測 | ||
1.一種利用血紅素/伴侶素人工酶通過與過氧化氫反應檢測溶液中物質含量的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，血紅素/伴侶素人工酶以鄰苯二胺為底物，通過與溶液中的過氧化氫反應直接檢測溶液中過氧化氫的含量。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述檢測步驟包括：
將2mM鄰苯二胺溶液和20μM血紅素/伴侶素人工酶溶液以及含1-750μM過氧化氫溶液等體積混合，得到混合液Ⅰ；
將所得混合液Ⅰ置于37℃水浴鍋中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入3.5μM硫酸終止反應，得到混合液Ⅱ；
測量混合液Ⅱ于492nm處的吸光度；
制備所得吸光度與過氧化氫濃度的標準曲線，計算過氧化氫的含量。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述過氧化氫含量的線性范圍為10-90μM，檢測限為7μM。
5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述溶液為工業污水或市政污水。
6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，血紅素/伴侶素人工酶以鄰苯二胺為底物，通過與葡萄糖溶液中的過氧化氫反應間接檢測葡萄糖溶液中葡萄糖的含量。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述檢測步驟包括：
將5μl 200units/mL葡萄糖氧化酶和50μL 0.1-1.8mM葡萄糖溶液混合，得到混合液Ⅲ；
將所得混合液Ⅲ置于37℃水浴鍋中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入等體積2mM鄰苯二胺和20μM血紅素/伴侶素人工酶，得到混合液Ⅳ；
將所得混合液Ⅳ置于37℃水浴鍋中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入3.5μM硫酸終止反應，得到混合液Ⅴ；
測量混合液Ⅴ于492nm處的吸光度；
制備所得吸光度和葡萄糖濃度的標準曲線，計算葡萄糖的量。
8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述葡萄糖的線性范圍為15μM-200μM，檢測限為11μM。
9.根據權利要求1-8任一項所述的應用，其特征在于，所述血紅素/伴侶素人工酶具有直徑為4.5nm的納米空腔，且所述納米空腔中同時含有多個血紅素活性位點。
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