[發明專利]穩定低表達miR-497的HPMC細胞株及其應用

有效

• 申請號: 201711398737.3
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108060133B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 趙占正;郭佳;肖靜;程根陽;劉棟;竇艷娜;周夢文;王春燕;王曉陽;袁文明;尚進;李爭艷;張曉雪;楊書光
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113
• 代理公司: 河南科技通律師事務所 41123
• 代理人: 樊羿;張曉輝

本發明公開了一種穩定低表達miR?497的HPMC細胞株及其應用。穩定低表達miR?497的HPMC細胞株的名稱為：人腹膜間皮細胞穩定表達下調miR?497，保藏編號為：CCTCC NO：C2017235，其基因組中含miRNA?497inhibit質粒。用嘌呤霉素篩選HPMC穩轉細胞株的篩選濃度為1.5～2.5μg/ml。HPMC穩轉株中miR?497的表達與VEGF呈負相關。本發明制備出的穩定miR?497表達下調的HMPC細胞株可用于進一步的動物實驗甚至臨床試驗，可用于探索PF的發生機制，尋找PF新的緩解措施，為患者繼續維持PD開辟新道路。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種穩定低表達miR-497的HPMC細胞株及其應用。

背景技術

終末期腎臟病（End stage renal disease，ESRD）是21世紀全人類面臨的主要健康問題之一，ESRD患者數以每年約10%的速度增長。近年來，隨著高血壓、肥胖、Ⅱ型糖尿病發病率的逐年升高及人口老齡化的加劇，慢性腎臟疾病（Chronic kidney disease，CKD）導致的 ESRD 患者人數急劇增多。

ESRD患者必須依賴腎臟代替治療（Renal replacement therapy，RRT）。目前已經有腎移植、血液透析（Hemodialysis，HD）和腹膜透析（Peritoneal dialysis， PD）三大替代治療方式。但是，RRT和HD費用昂貴，而PD具有保護殘余腎功能、交叉感染少、居家透析、活動相對自由、花費相對較低等優勢，已成為腎臟一體化療法中的重要組成部分。

然而，臨床研究發現，隨著患者PD時間延長，高濃度葡萄糖及其在高溫消毒時產生的降解產物、酸性透析液的低pH值、乳酸鹽緩沖液的使用、透析液的高滲透壓等生物不相容性因素和反復發作的腹膜炎，會引起腹膜形態和功能的改變，最終使腹膜纖維化（Peritoneal fibrosis，PF），導致超濾衰竭（Ultrafiltration Failure，UFF），而其具體詳細的發病機制尚未明了。

目前，已有研究表明，腹膜炎癥、血管新生和間皮細胞損傷是PF的重要機制。血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在腹膜炎癥、血管新生和間皮細胞損傷中發揮重要作用。miR-497高表達可抑制腫瘤組織血管新生及細胞外基質積聚。發明人前期實驗已證明高糖可誘導損傷的腹膜間皮細胞miR-497表達減少，VEGF表達增多。

為了深入探索PF的發生機制，尋找PF新的緩解措施，為患者繼續維持PD奠定堅實的基礎，對腹膜間皮細胞進行基因改造是十分必要的。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種穩定低表達miR-497的HPMC細胞株及其應用。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

構建一種穩定低表達miR-497的HPMC細胞株，其特征在于，所述細胞株的名稱為：人腹膜間皮細胞穩定表達下調miR-497，其保藏編號為：CCTCC NO：C2017235。

優選的，其基因組中含miRNA-497inhibit質粒。

設計一種用嘌呤霉素篩選所述穩定低表達miR-497的HPMC細胞株的方法，所述嘌呤霉素的濃度為1.5～2.5μg/ ml。

優選的，所述嘌呤霉素的濃度為1.8～2.2μg/ ml。

優選的，所述嘌呤霉素的濃度為2μg/ ml。

所述穩定低表達miR-497的HPMC細胞株在調控HPMC細胞VEGF表達中的應用。