[發明專利]一種藥敏試劑盒及其制備方法、以及細菌藥敏檢測方法

在審

• 申請號: 201711398573.4
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108004134A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 熊江林;吳靈英;劉玉蘭;王銳;邱銀生;丁斌鷹
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/22;C12Q1/18
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

1.一種藥敏試劑盒，其特征在于，所述藥敏試劑盒包括：

盒體，所述盒體內設有容納腔；

培養基平板，設于所述容納腔，所述培養基平板包括普通營養瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、SS瓊脂平板以及含輔酶A的胰酪胨大豆肉湯瓊脂平板；

藥敏紙片，設于所述容納腔，所述藥敏紙片設有20個，且每一所述藥敏紙片對應含有20種藥物中的任意一種，所述20種藥物包括泰拉菌素、乙酰異戊酰基泰樂菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、環丙沙星、恩諾沙星、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、泰樂菌素、替米考星、大觀霉素、氟苯尼考、頭孢噻呋、泰妙菌素、強力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素；以及，

試驗器械，設于所述容納腔，所述試驗器械包括鑷子、組織鉗、組織剪、采樣袋以及直尺。

2.一種如權利要求1所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述藥敏試劑盒包括培養基平板和藥敏紙片，所述藥敏試劑盒的制備方法包括以下步驟：

配制培養基，使培養基凝固后形成培養基平板；

配制藥物溶液，使藥物溶液浸泡空白藥敏片后形成藥敏紙片；

其中，所述培養基包括普通營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、SS瓊脂培養基以及含輔酶A的胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基，以對應形成普通營養瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、SS瓊脂平板和含輔酶A的胰酪胨大豆肉湯瓊脂平板；

所述藥物溶液對應由如權利要求1所述的20種藥物中的任意一種配制而成，以對應形成含有所述20種藥物中的任意一種藥物的藥敏紙片。

3.如權利要求2所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述普通營養瓊脂培養基包括以下濃度的組分：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化鈉5.0g/L以及瓊脂14.0g/L；所述營養瓊脂培養基的pH值為7.0～7.4。

4.如權利要求2所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述麥康凱瓊脂培養基包括以下濃度的組分：蛋白胨20.0g/L、乳糖10.0g/L、牛膽鹽5.0g/L、氯化鈉5.0g/L、中性紅0.075g/L以及瓊脂13.0g/L；所述麥康凱瓊脂培養基的pH值為7.2～7.6。

5.如權利要求2所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述SS瓊脂培養基包括以下濃度的組分：牛肉粉5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、乳糖10.0g/L、牛膽鹽8.5g/L、枸櫞酸鈉8.5g/L、硫代硫酸鈉8.5g/L、枸櫞酸鐵1.0g/L、中性紅0.025g/L、煌綠0.00033g/L以及瓊脂17.0g/L；所述SS瓊脂培養基的pH值為6.9～7.1。

6.如權利要求2所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述含輔酶A的胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基由以下步驟配制而成：

配制胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基，將胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基于121℃高壓滅菌15min后，在無菌操作室冷卻至50℃，向胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基中加入已過濾除菌的輔酶A，即得含輔酶A的胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基；

其中，所述胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基包括以下濃度的組分：胰酪胨15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物5g/L、氯化鈉5g/L以及瓊脂15g/L，所述胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基的pH值為7.1～7.5；所述輔酶A的添加量為所述胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養基體積的10％，所述輔酶A的濃度為0.15g/L。

7.如權利要求2所述的藥敏試劑盒的制備方法，其特征在于，配制藥物溶液，使藥物溶液浸泡空白藥敏片后形成藥敏紙片的步驟，包括：

將20種藥物中的任意一種溶解于溶劑中，形成藥物溶液；

取藥物溶液滴加到裝有空白藥敏片的抗生素瓶中，使藥物溶液浸泡空白藥敏片25～35min后形成藥敏片，將藥敏片混合并使藥敏片貼靠在抗生素瓶的內壁上；

將裝有藥敏片的抗生素瓶冷凍25～35min后，進行凍干處理26～33h，獲得藥敏紙片。

8.一種細菌藥敏檢測方法，其特征在于，所述細菌藥敏檢測方法使用如權利要求1所述的藥敏試劑盒進行，包括如下步驟：

無菌采集病料的病變組織，并將病變組織接種至對應的培養基平板上，以使病變組織中的細菌接種至培養基平板；

將藥敏紙片貼于已接種細菌的培養基平板上，并使藥敏紙片與培養基緊密接觸，完成藥敏紙片粘貼；

在藥敏紙片粘貼完成后的15～30min內，將培養基置于36～38℃條件下培養，12～24h后觀測抑菌圈直徑，并根據抑菌圈直徑判斷病料組織中的細菌對藥敏紙片中所含藥物成分的敏感性。