[發明專利]用于鑒定東北紅豆杉的SNP分子標記及應用

在審

• 申請號: 201711398252.4
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN109486982A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 林源吉;丁佳女;鄭宜文
• 申請（專利權）人: 杭州百邁生物股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種用于鑒定東北紅豆杉的SNP分子標記，所述SNP分子標記位于SEQ ID NO.1所示序列的第444位堿基，若第444位的堿基為T，則鑒定為東北紅豆杉。本發明基于SNP分子標記建立起了快速鑒定東北紅豆杉的體系。從而達到快速、準確檢測東北紅豆杉的目的，對于口岸物種檢驗工作等具有重大的意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地說，涉及用于東北紅豆杉的SNP分子標記及其應用。

背景技術

東北紅豆杉(學名：Taxus cuspidata S.et Z.)，又名紫杉。為紅豆杉科(Taxaceae))喬木植物，是第三紀孑遺的珍貴樹種。其材質優良，紋理通直，結構致密，富彈性，力學強度高，具光澤，有香氣，耐腐朽，不易開裂反翹，不含松脂，邊材幅狹黃白色，心材紫赤褐色(紫杉因此而得名)。該種不僅是材用植物，也是重要的藥用植物，其莖、枝、葉、根可入藥，主要成分含紫杉醇、紫杉堿、雙萜類化合物。具有抗癌功能，并有抑制糖尿病及治療心臟病的作用。東北紅豆杉除有極高的藥用價值外，尚有極佳的觀賞價值，這是其它品種的紅豆杉所無法企及的另一大優勢。東北紅豆杉側枝多，紅枝綠葉，株形嬌美，所結紅豆艷麗多姿，酷似南方的相思豆。因而用于制作珍稀觀賞盆景，也可用于制作園林風景樹。

紅豆杉有植物活化石和國寶之稱。從中提取的紫杉醇是世界公認的抗癌藥物，每公斤市場價在一千萬美元以上，是世界上瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物，屬國家一級保護植物，至今已有250萬年的歷史。由于它的根、莖、葉、皮及種子含有紫杉醇，所以價格相當昂貴，不少國家將其列為國寶。美國、英國、俄羅斯、韓國和中國對紫杉進行多年研究，將紫杉醇從紫杉中提煉出來，用于臨床治療癌癥。經驗證明，紫杉醇具有獨特的抗腫瘤機制和顯著的抑制腫瘤的作用，被專家和學者確認為本世紀初國際上最有開發前途的抗癌藥物。

東北紅豆杉不僅是珍稀的藥用植物也是園林、庭院綠化、美化的佳品，是目前最珍貴稀有的高檔綠化樹種。具有獨特的盆景觀賞價值是東北紅豆杉的又一大特色，應用矮化技術處理的東北紅豆杉盆景造型古樸典雅，枝葉緊湊而不密集，舒展而不松散，紅莖、紅枝、綠葉、紅豆使其具有觀莖、觀枝、觀葉、觀果的多重觀賞價值。光滑的紅莖代表坦蕩與高貴，常綠的針葉表達堅毅與永恒，酷似相思豆的紅豆彰現了愛心與思念。整株造型含而不露，超凡脫俗，具有濃厚的生活氣息和文化底蘊。東北紅豆杉因其資源稀少，被列為中國一級珍稀樹種加以保護。

形態學鑒定是東北紅豆杉鑒定中常采用的方法，但形狀特征易受生境、氣候、生理狀況等的影響而常常導致主觀辨別上的偏差，僅靠形態差異難以準確鑒定。

近年來，利用分子生物學技術進行物種鑒定已經在一些珍惜物種及檢驗檢疫方面得到了應用，如何利用分子生物學技術建立高效、快速、靈敏且準確度高的鑒定方法將是東北紅豆杉鑒定領域的關鍵技術之一。

發明內容

本發明提供了一種用于鑒定東北紅豆杉的SNP分子標記，所述SNP分子標記位于SEQ ID NO.1所示序列的第444位堿基，若第444位的堿基為T，則鑒定為東北紅豆杉。

上述SNP分子標記在東北紅豆杉鑒定中的應用。

進一步的，從南方紅豆杉、曼地亞紅豆杉、歐洲紅豆杉、西藏紅豆杉、東北紅豆杉和云南紅豆杉中鑒定出東北紅豆杉。

本發明提供了一種用于鑒定東北紅豆杉的核苷酸序列，包括SEQ ID NO.1，或者SEQ ID NO.1所對應的cDNA或mRNA，所述SEQ ID NO.1序列的第444位的堿基為T。

本發明提供了一種鑒定東北紅豆杉的試劑盒，包括用于特異性檢測SEQ ID NO.1序列第444位的堿基為T存在與否的一種或多種引物，或引物和探針的組合。

進一步的，所述引物和探針選自：

用于測序檢測的特異性擴增引物和測序引物，引物序列分別為：