[發明專利]一株用于防治黃瓜枯萎病的貝萊斯芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201711396283.6
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN107937313B
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 蘭成忠;游泳;楊秀娟;阮宏椿
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;A01G13/00;C12R1/07
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供了一株用于防治黃瓜枯萎病的貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）及其應用。所述貝萊斯芽孢桿菌編號為FJ17?4，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記入冊的保藏號為CGMCC No.14642。本發明的貝萊斯芽孢桿菌FJ17?4對黃瓜枯萎病菌???尖孢鐮刀菌黃瓜專化型（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）具有顯著的拮抗作用，能有效防治黃瓜枯萎病，防治效果穩定。本發明為黃瓜枯萎病生物防治提供了優良菌種資源。

技術領域

本發明涉及微生物種質資源的開發與利用領域，具體涉及一株用于防治黃瓜枯萎病的貝萊斯芽孢桿菌及其應用。

背景技術

由尖孢鐮刀菌黃瓜?；停?Italic>Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum Owen）侵染引起的黃瓜枯萎病，是黃瓜生產上一種較難防治的土傳系統性病害之一，該病害具發病快、病害重、傳播迅速等特點，一旦發生常造成巨大經濟損失。此病的初侵染源主要是帶菌的土壤、病株殘體、種子和糞肥等，病菌從腐爛的寄主組織里散布到土中可營腐生活，存活時間長達5-6年或更長的時間。黃瓜枯萎病菌可借助雨水、灌溉水等進行遠距離傳播，整個生長期均能發生，以開花結瓜期發病最多。隨著農業結構的調整和設施栽培技術的發展，黃瓜種植面積也在不斷擴大，加之多年連作，使病菌在土壤中大量累積，導致黃瓜枯萎病大量暴發，并有進一步加重的趨勢，發病率一般在15%-35%之間，嚴重時達80%-90%，甚至絕收，嚴重影響黃瓜的產量和品質，是限制黃瓜生產發展的關鍵因素之一。黃瓜枯萎病是一種典型的土傳病害，病原菌侵染早期不表現癥狀，中后期才表現癥狀，目前該病害防治仍以化學殺菌劑為主，大量化學農藥長期、反復使用，嚴重污染環境、威脅人類身心健康，使病原菌逐漸產生抗性隨之變異產生很多生理小種。因此，黃瓜枯萎病防治急需綠色安全無公害且靶標性強的生物農藥。

本發明從健康黃瓜根部土壤中分離到一株對黃瓜枯萎病菌具有較高拮抗能力的細菌，經微生物分類學鑒定為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）。本發明為微生物源農藥的進一步研制和開發提供優良的出發菌株，同時對促進黃瓜產業的健康生產發展、增加瓜農收入、保障消費者健康、減少環境污染和維持農業可持續發展具有重大的理論和生產意義。

發明內容

本發明提供了一株用于防治黃瓜枯萎病的貝萊斯芽孢桿菌及其應用，該貝萊斯芽孢桿菌對黃瓜枯萎病具有穩定的防治作用。

一種貝萊斯芽孢桿菌，分類命名為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillusvelezensis），菌株編號：FJ17-4，已于2017年9月18日保藏于位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.14642。

本發明還提供了一種含有貝萊斯芽孢桿菌FJ17-4的生防菌劑，該生防菌劑活性成分為貝萊斯芽孢桿菌FJ17-4菌株，含菌量為1×10⁹～10¹⁰CFU/mL。

所述生防菌劑的制備方法，包括如下步驟：

（1）將低溫保存的貝萊斯芽孢桿菌FJ17-4在LB平板培養基上活化，在28℃下培養24小時，得到活化的菌株；

（2）用滅菌的接種環刮取一環步驟（1）活化的菌株接種于100 mL LB液體培養基中，于振蕩搖床中28℃，180rmp條件下培養至培養液OD600為0.5～0.8，獲得種子液；

（3）將種子液接種于發酵培養基中擴大培養24小時，調節發酵液中貝萊斯芽孢桿菌FJ17-4的濃度至1×10⁹～10¹⁰CFU/mL，獲得所述生防菌劑。