[發明專利]基于PRM檢測的卵巢癌標志物檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201711396031.3
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108152430A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 陳薇;阮宏強
• 申請（專利權）人: 上海中科新生命生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/60;G01N30/88
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 肖平安

本發明提供一種基于PRM檢測的卵巢癌標志物檢測試劑盒及其檢測方法，屬于卵巢癌標志物檢測技術領域，用于快速準確檢測5種標志物的含量，其包含常規質譜檢測用試劑，重同位素標記標準肽段試管及專用的色譜分析柱，通過往血清中摻入5個卵巢癌蛋白標志物的10個人工合成的重標同位素肽段，使用PRM技術對血清中內源的5個卵巢癌蛋白標志物進行絕對定量分析，以達到幫助卵巢癌的診斷的目的，具有操作簡單、耗時少、實驗周期短、特異性強和靈敏度高的優點。

技術領域

本發明屬于卵巢癌標志物檢測技術領域，尤其涉及一種基于PRM檢測的卵巢癌標志物檢測試劑盒，還涉及一種使用該試劑盒的檢測方法。

背景技術

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位，約占女性全身惡性腫瘤的4％。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。

平行反應監測(Parallel reaction monitoring，PRM)平行反應監測屬于靶向MS/MS分析，在整個液相分離過程中會不斷地對每一個目標母離子的全部碎片離子圖譜進行記錄。相比于傳統SRM只檢測目標離子對的模式，PRM檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。PRM主要的優勢就是使用了超高分辨率的Orbitrap質量分析器，其能夠將干擾信息與真實的信號進行區分，以及相比于傳統的SRM方法能夠更好的保證分析的選擇性。

美國弗米利恩公司與Quest Diagnostics公司合作研發的OVA1測試盒能夠在盆腔包塊中檢查出是否罹患卵巢癌，并確定是否需要手術治療，幫助病人和醫護人員確定屬于什么類型的手術，以及應該由誰負責實施。OVA1卵巢癌定性血清測試將五個免疫測定組合形成一個單一數字評分系統。該免疫測試確定了五個行之有效的生物標志物---甲狀腺素，載脂蛋白A-1，β2-微球蛋白(Beta2M)，轉鐵蛋白及癌抗原125，用來確定盆腔包塊婦女可能發生腫瘤的可能性。但OVA1測試盒的檢測的操作復雜、耗時長，且其靈敏度和特異性相對較差，已經不能滿足需要。

發明內容

基于現有技術存在上述問題，本發明提供一種基于PRM檢測的卵巢癌標志物檢測試劑盒及其檢測方法，用于快速準確檢測5種標志物的含量，其包含常規質譜檢測用試劑，重同位素標記標準肽段試管及專用的色譜分析柱，通過往血清中摻入5個卵巢癌蛋白標志物的10個人工合成的重標同位素肽段，使用PRM技術對血清中內源的5個卵巢癌蛋白標志物進行絕對定量分析，以達到幫助卵巢癌的診斷的目的，具有操作簡單、耗時少、實驗周期短、特異性強和靈敏度高的優點。

本發明通過以下詳細技術方案達到目的：

一種適用卵巢癌PRM檢測用的色譜分析柱，其包括柱管、填料和槍頭，填料填充于柱管內，槍頭套在柱管的一端；所述的柱管長度為115-125mm、外徑為355-365um、內徑為70-80um；所述的填料是2.5-3.5um粒徑的C18反相填料。

其中，所述的柱管長度為120mm、外徑為360um、內徑為75um；所述的填料是3um粒徑的C18反相填料。

一種基于PRM檢測的卵巢癌標志物檢測試劑盒，包括常規質譜檢測用試劑、重同位素標記標準肽段試管、上述色譜分析柱、溶解buffer；所述的重同位素標記標準肽段試管包含甲狀腺素、載脂蛋白A–1、β2-微球蛋白(Beta2M)、轉鐵蛋白和癌抗原125中的十條唯一序列，其中每個蛋白各有兩段肽段序列。

其中，所述的重同位素標記標準肽段是VEHSDLSFSK、VNHVTLSQPK、EFQLFSSPHGK、HQTVPQNTGGK、GSPAINVAVHVFR、AADDTWEPFASGK、DLATVYVDVLK、DYVSQFEGSALGK、LGIWDDFIPK和ELPLLSPPQDK。

其中，所述的重同位素標記標準肽段的重同位素標記的氨基酸分別位于肽段序列C-末端的精氨酸和賴氨酸上。