[發明專利]一種從蛇毒中提取凝血因子X激活劑的方法

有效

• 申請號: 201711394414.7
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN109943554B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 張世賢;李賀平
• 申請（專利權）人: 舒泰神（北京）生物制藥股份有限公司;北京諾維康醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;A61K38/48;A61P7/04
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 劉繼富;王春偉

1.一種從圓斑蝰蛇蛇毒中提取凝血因子X激活劑的方法，其特征在于，包括：

(a)獲得蛇毒原料液；

(c)將蛇毒原料液進行陰離子交換柱層析，收集目標峰對應的組分，其后用于羥基磷灰石柱層析；

其中所述陰離子交換柱層析的層析條件如下：

填料為瓊脂糖介質；

洗脫液為含NaCl的pH值為8.0-8.6的Tris-HCl緩沖液，其中Tris-HCl緩沖液的濃度為10mM-30mM，NaCl的濃度為0.1M-0.5M；

(b)進行羥基磷灰石柱層析，收集目標峰對應的組分獲得凝血因子X激活劑；

其中所述羥基磷灰石柱層析的層析條件如下：

填料為I型或II型羥基磷灰石填料；

洗脫液為含NaCl的pH值為6.5-7.5的磷酸緩沖液，其中磷酸緩沖液的濃度為10mM-30mM，NaCl的濃度為0.1M-0.8M。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，磷酸緩沖液pH值為6.8，磷酸緩沖液濃度為20mM；NaCl的濃度為0.4M。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)羥基磷灰石柱層析的洗脫流速為50cm/小時-1000cm/小時。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)羥基磷灰石柱層析的洗脫流速為100cm/小時-800cm/小時。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)羥基磷灰石柱層析的洗脫流速為600cm/小時。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)中，陰離子交換柱層析的填料選自Sepharose H.P.、Sepharose F.F.或Capto。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(c)中，陰離子交換柱層析的填料選自Q Sepharose H.P.、Q Sepharose F.F.或Capto Q。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)中，Tris-HCl緩沖液的pH值為8.5，Tris-HCl緩沖液的濃度為20mM；NaCl的濃度為0.2M。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)的陰離子交換柱層析的洗脫流速為30cm/小時-150cm/小時。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(c)的陰離子交換柱層析的洗脫流速為80cm/小時-120cm/小時。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，步驟(c)的陰離子交換柱層析的洗脫流速為為90cm/小時。

12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(b)的羥基磷灰石柱層析之后，還包括以下步驟：

(d)將步驟(b)收集的目標峰對應的組分進行分子篩層析來進一步純化，收集目標峰對應的組分獲得凝血因子X激活劑，

其中所述分子篩層析的層析條件如下：

填料選自凝膠過濾介質；

洗脫液為pH值為6.5-7.5的磷酸緩沖液，磷酸緩沖液濃度為40mM-80mM。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，步驟(d)中，磷酸緩沖液pH值為6.8，濃度為50mM。

14.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，步驟(d)分子篩層析的洗脫流速為10cm/小時-35cm/小時。

15.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，步驟(d)分子篩層析的洗脫流速為20cm/小時。