[發(fā)明專利]一種選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體的熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711394066.3
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN108191752B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚嘉恒;黃志紓;陳修財(cái);陳碩斌
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D215/12
• 分類號(hào): C07D215/12;C07D401/06;C07D215/14;C07D405/06;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

本發(fā)明提供了一種選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G?四鏈體的熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。所述熒光探針，其結(jié)構(gòu)如式（Ⅰ）所示；；其中，Ar為芳香環(huán)或芳香雜環(huán)；R₁為氟、氨基或胺類取代基；A^?為N甲基化陰離子、碘離子、對甲苯磺酸離子或三氟甲磺酸離子。本發(fā)明提供的熒光探針在細(xì)胞內(nèi)可以特異性地檢測識(shí)別RNA G?四鏈體，檢測過程不受其他組分的干擾，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)跟蹤活細(xì)胞中RNA G?四鏈體運(yùn)動(dòng)過程以及折疊與去折疊的過程；同時(shí)所述熒光探針的制備過程簡單、成本低廉，并且結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，便于儲(chǔ)存，在RNA G?四鏈體生物學(xué)功能研究上具有廣闊的應(yīng)用空間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種熒光探針，更具體地，涉及一種選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體的熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

G-四鏈體(G-quadruplex)是由富含鳥嘌呤的DNA或RNA形成的一種重要核酸二級(jí)結(jié)構(gòu)。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，人類基因組中約有37萬個(gè)具有形成G-四鏈體可能性的序列，包括端粒末端鳥嘌呤重復(fù)序列啟動(dòng)子區(qū)、核糖體DNA(rDNA)、轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TSS)、非翻譯區(qū)(UTR)等區(qū)域，預(yù)示著G-四鏈體在人類基因組和轉(zhuǎn)錄組中扮演著重要的角色，參與了許多重要生命過程的調(diào)控。近十年來，對G-四鏈體的研究主要集中于DNA G-四鏈體；對RNA G-四鏈體的研究相對較少。近年的研究發(fā)現(xiàn)RNA G-四鏈體同樣參與了許多生命過程的調(diào)控，包括端粒的維持、pre-mRNA剪切、mRNA識(shí)別和翻譯等等。因此，在體內(nèi)或體外試驗(yàn)中能夠特異性地檢測出RNA G-四鏈體的存在，對于研究RNA G-四鏈體相關(guān)生物學(xué)功能以及開發(fā)以RNAG-四鏈體為靶點(diǎn)的抗癌藥物等方面都具有非常重要的作用。

目前，在體內(nèi)和體外檢測DNA G-四鏈體結(jié)構(gòu)的研究取得了一些進(jìn)展。已有一些熒光分子能夠?qū)崿F(xiàn)DNA G-四鏈體體內(nèi)和體外的檢測。然而在體內(nèi)或體外能夠特異性識(shí)別RNAG-四鏈體的熒光探針卻鮮有報(bào)道。而且由于體內(nèi)大大過量的其他核酸二級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，以及復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，使得體內(nèi)特異性檢測RNA G-四鏈體相對于體外檢測需要解決更多的難題。

因此，亟待于提供一種細(xì)胞內(nèi)特異性識(shí)別RNA G-四鏈體的熒光探針。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于基于現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體的熒光探針。本發(fā)明提供的熒光探針在細(xì)胞體內(nèi)能夠特異性的識(shí)別RNA G-四鏈體，而不受其他組分，特別是DNA G-四鏈體的干擾，進(jìn)而能夠準(zhǔn)確的檢測和實(shí)時(shí)跟蹤活細(xì)胞中RNA G-四鏈體。

本發(fā)明的目的之二在于提供所述選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體的熒光探針的制備方法。

本發(fā)明的目的之三在于提供所述熒光探針在檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體上的應(yīng)用。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：

一種選擇性檢測細(xì)胞內(nèi)RNA G-四鏈體的熒光探針，其結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：

其中，Ar為芳香環(huán)或芳香雜環(huán)；R₁為氟、氨基或胺類取代基；A^-為N甲基化陰離子、碘離子、對甲苯磺酸離子或三氟甲磺酸離子。