[發(fā)明專利]一種測定透明質(zhì)酸鈉凝膠中填充的交聯(lián)葡聚糖含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711384231.7
• 申請日: 2017-12-20
• 公開（公告）號: CN108254456B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳海相;林型跑;謝甲增;蔣丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 陳華

本發(fā)明涉及一種測定透明質(zhì)酸鈉凝膠中填充的交聯(lián)葡聚糖含量的方法，包括如下步驟：1)采用裂解氣相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用法對若干組質(zhì)量不同的交聯(lián)葡聚糖純品進(jìn)行高溫裂解分析，并根據(jù)裂解色譜圖得到特征裂解峰的峰面積與質(zhì)量的線性關(guān)系；所述特征裂解峰為丙三醇的特征裂解峰；2)繼續(xù)對待測樣品進(jìn)行高溫裂解分析，根據(jù)所述特征裂解峰的出峰時間得到待測樣品的特征裂解峰的峰面積，之后得到待測樣品中填充的交聯(lián)葡聚糖的質(zhì)量或含量。該方法操作簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析檢測領(lǐng)域，具體涉及一種測定透明質(zhì)酸鈉凝膠中填充的交聯(lián)葡聚糖含量的方法。

背景技術(shù)

交聯(lián)葡聚糖是將純化后的線性葡聚糖(吡喃型葡聚糖)與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，再導(dǎo)入丙三醇側(cè)鏈，而在葡聚糖鏈間以醚鍵形成交聯(lián)的三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物，通常為白色珠狀微粒。

目前，交聯(lián)葡聚糖的品質(zhì)指標(biāo)主要有：粒徑分布、微生物、內(nèi)毒素、工作pH值、操作溫度、分子量分離范圍等。交聯(lián)葡聚糖廣泛應(yīng)用于凝膠過濾，分離分子量大小不同的蛋白質(zhì)、酶、核酸和多糖類高分子化合物。交聯(lián)葡聚糖具有復(fù)雜的空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可作為藥物的負(fù)載物，進(jìn)入血液后能夠有效的達(dá)到目標(biāo)地點(diǎn)，防止因過早降解導(dǎo)致負(fù)載藥物的釋放而使效果降低。

此外，用交聯(lián)葡聚糖填充修飾透明質(zhì)酸鈉，可以降低人體內(nèi)特定酶分解透明質(zhì)酸鈉的速度，保持效力，具有較高的臨床價值，可用于治療關(guān)節(jié)炎，加速傷口愈合，也可添加到化妝品達(dá)到保濕和抗皮膚老化的功能。

黏膜填充修飾用透明質(zhì)酸鈉凝膠醫(yī)用新材料中填充有交聯(lián)葡聚糖，可用于替代進(jìn)口產(chǎn)品，但至今還沒有醫(yī)用新材料中填充交聯(lián)葡聚糖的相關(guān)定量檢測技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的空缺，提供一種測定透明質(zhì)酸鈉凝膠中填充的交聯(lián)葡聚糖含量的方法，該方法操作簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

本發(fā)明所提供的技術(shù)方案為：

一種測定透明質(zhì)酸鈉凝膠中填充的交聯(lián)葡聚糖含量的方法，包括如下步驟：

1)采用裂解氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對若干組質(zhì)量不同的交聯(lián)葡聚糖純品進(jìn)行高溫裂解分析，并根據(jù)裂解色譜圖得到特征裂解峰的峰面積與質(zhì)量的線性關(guān)系；所述特征裂解峰為丙三醇的特征裂解峰；

2)繼續(xù)對待測樣品進(jìn)行高溫裂解分析，根據(jù)所述特征裂解峰的出峰時間得到待測樣品的特征裂解峰的峰面積，之后得到待測樣品中填充的交聯(lián)葡聚糖的質(zhì)量或含量。

本發(fā)明待測樣品透明質(zhì)酸鈉凝膠中包含交聯(lián)葡聚糖和透明質(zhì)酸鈉。透明質(zhì)酸鈉凝膠的主要特征裂解峰為1-羥基-2-丙酮、2-羥基乙醛、乙酸、丙酮酸甲酯、1,3-環(huán)戊二酮、乙酰胺、3-甲基環(huán)戊烷-1,2-二酮、麥芽酚、1,3-二羥基丙酮、3,5-二羥基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、丙位戊內(nèi)酯、1,4-二氧六環(huán)-2-醇、1,6-脫水-β-D-吡喃葡萄糖。而其中僅在交聯(lián)葡聚糖中出現(xiàn)的特征裂解峰為丙酮酸甲酯、1,3-環(huán)戊二酮、3-甲基環(huán)戊烷-1,2-二酮、麥芽酚、1,3-二羥基丙酮、3,5-二羥基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、1,4-二氧六環(huán)-2-醇、1,6-脫水-β-D-吡喃葡萄糖。

本發(fā)明創(chuàng)造性地發(fā)現(xiàn)其中丙三醇的特征裂解峰的峰面積與交聯(lián)葡聚糖的質(zhì)量成線性關(guān)系。利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分離分析該體系的裂解組分，根據(jù)交聯(lián)葡聚糖的特征裂解組分對其進(jìn)行定性，并根據(jù)僅出現(xiàn)在交聯(lián)葡聚糖中的裂解特征組分(丙三醇)的峰面積對交聯(lián)葡聚糖進(jìn)行定量測定，該方法可以同時實(shí)現(xiàn)定性和定量分析。

本發(fā)明根據(jù)丙三醇特征裂解峰的峰面積與交聯(lián)葡聚糖質(zhì)量的線性關(guān)系，即以交聯(lián)葡聚糖特征裂解組分的峰面積為縱坐標(biāo)，以交聯(lián)葡聚糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到交聯(lián)葡聚糖純品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和公式(1)計算凝膠樣品中交聯(lián)葡聚糖的百分含量。