[發明專利]單向式羊膜脫細胞方法

有效

• 申請號: 201711383742.7
• 申請日: 2017-12-20
• 公開（公告）號: CN108048391B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 董教明;吳復躍;何振東
• 申請（專利權）人: 上海睿泰生物科技股份有限公司;合肥欣睿生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;A61L27/36
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種單向式羊膜脫細胞方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)新鮮羊膜的剝離和清洗；

b)將步驟a)所得羊膜平鋪固定在具有平面的支撐體上；

c)將b)步驟處理的羊膜放入脫細胞溶液中處理；

d)將c)步驟處理的羊膜洗滌后放入核酸酶溶液中處理；

e)將d)步驟處理的羊膜洗滌后得到人脫細胞羊膜；

將步驟a)所得羊膜平鋪固定在具有平面的支撐體上時，將羊膜的基質層向下平整鋪在支撐體表面；

步驟c)、d)、e)對羊膜處理時，所述羊膜均固定在具有平面的支撐體上；

所述支撐體保障羊膜的基質層不直接與脫細胞溶液或核酸酶溶液接觸，脫細胞溶液或核酸酶溶液僅通過羊膜上皮層滲透到羊膜的基質層；

所述脫細胞溶液包括主成分及配制溶液，所述主成分選擇TrypLE^TM Select Enzyme、胰蛋白酶、中性蛋白酶、非離子型去污劑、兩性離子去污劑的組合；所述配制溶液為無菌的0.9％氯化鈉注射液、磷酸鹽緩沖液、D-Hanks溶液或HEPES溶液；

TrypLE^TM Select Enzyme濃度為0.001％-5％v/v，胰蛋白酶濃度為0.001％-5％v/v，中性蛋白酶濃度為0.001％-5％v/v，非離子型去污劑濃度為0.001％-5％v/v，兩性離子去污劑濃度為0.001％-5％v/v；

所述支撐體包括一作為支撐面的平面，以及位于支撐面側面的凹槽，所述支撐體為剛性物體，將步驟a)所得羊膜平鋪固定在具有平面的支撐體上的方法為：將羊膜平鋪在支撐體的平面上，用彈性圈將平鋪后羊膜的邊緣固定在支撐體側面的凹槽中。

2.根據權利要求1所述的一種單向式羊膜脫細胞方法，其特征在于，將b)步驟處理的羊膜放入脫細胞溶液中處理的條件為：在4-37℃下震蕩處理1min-48h。

3.根據權利要求1所述的一種單向式羊膜脫細胞方法，其特征在于，所述核酸酶溶液是全能型核酸酶溶液或廣譜型核酸酶溶液，或DNA酶和RNA酶的混合溶液，

全能型核酸酶溶液或廣譜型核酸酶溶液選自Super Nuclease、Benzonase Nuclease或Biolonase Nuclease；將c)步驟處理的羊膜洗滌后放入核酸酶溶液中處理的條件為：在37℃環境中下震蕩處理1-48小時。

4.根據權利要求1所述的一種單向式羊膜脫細胞方法，其特征在于，步驟d)與步驟e)中的洗滌條件為：用無菌的0.9％氯化鈉注射液在4-37℃環境下對處理后的羊膜進行震蕩清洗。