[發明專利]一種適用于弓形蟲的ELISA的方法有效
| 申請號： | 201711381495.7 | 申請日： | 2017-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN108048478B | 公開（公告）日： | 2019-11-05 |
| 發明（設計）人： | 陳啟軍;李燁馨;姜寧;楊娜;桑曉宇;馮穎 | 申請（專利權）人： | 沈陽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/66;G01N33/96;G01N33/68 |
| 代理公司： | 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101 | 代理人： | 張述學 |
| 地址： | 110866 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 適用于 弓形蟲 elisa 方法 | ||
一種適用于弓形蟲的ELISA的方法，其特征是使用TGME49_223140 His標簽重組蛋白質及GST標簽重組蛋白質對豬血清進行檢測；將對含有目的片段的pEASY Simple Blunt質粒進行雙酶切，并將表達載體pET?28a，pGEX4T?1用同樣的限制性內切酶進行雙酶切；將重組表達載體pET?28a、pGEX4T?1分別轉化到工程菌E.coilBL21(DE3)和E.coil BL21中，進行蛋白質表達與純化；分別使用純化的TGME49_223140His標簽重組蛋白質以及GST標簽重組蛋白質作為包被蛋白質，建立ELISA檢測方法。
技術領域
本發明涉及弓形蟲TGME49_223140基因的獲取、表達純化及ELISA方法的建立。
背景技術
弓形蟲病是由剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)引起的一種人獸共患寄生蟲病，成世界性分布；對免疫功能不全及免疫抑制的人及動物危害嚴重。
弓形蟲引起宿主致病的關鍵性分子目前尚不清楚。
弓形蟲病威脅著人類的健康，以及畜牧業的發展。
發明內容
本發明的目的：建立敏感有效的豬弓形蟲ELISA檢測方法。
本發明提供的技術方案如下：
1核苷酸序列
(1)從TOXODB(http://toxodb.org/toxo/)數據庫獲得核酸序列。
(2)將該目的片段經PCR、膠回收，連接到pEASY Simple Blunt載體上，于-80℃保存。 TGME49_223140核苷酸序列：
ATGGAGCTCATCTACGACTCGACGCCTGCGGCTCTCGCCACCGTCCTCTTGGCTCGCTATGTTCAGCCGTGTCTCCTCCAGCGACAGCCGCCGCTCTCTCTGTCCCTCTGCTTTCTCGGCAATGAGGCGAAGGCGT ACCTGAAAGCCCAAGAGGCGGAGCTTCCCGTGCTCCTGGCTGCCAAAGAAGGCGCGGGAGCAGAGC CGGCGTTTCCTCCCCTTCGCGAACCTGCGACGATTCTGAGGCGCCTGGCCACGGAGGCGGCCGTCAC ACCCGCGTCTGGGAAGAGCTCGTCTGCCGGAGCTCTCTTGCTCGGTGGCGAATCTGACGTTGAACAG GCACAAGTATCGCAGTGGCTGTCCTTCTGCTGCGAGAACAACTTCGCGATTCGCGGTGCTTCGCTCTT CCAGCATCTCCACAGTCACCTGGCTACGCGCACTTTCTTCTGTGGAGACCGTCTCACCATCGCAGATT TCGCCGTCTTCGTTTCCTGCTATGCCTGGATGGCCTCTTCTTCTCAGAAAGAACGTGTCCTCTACTGCA ATTTAACCCGATGGATGGACTACATTCAACACCTTCCGGGCGTCATGAACGCTGTCGAGCAGCTTCCG CTTTTGAGCCTTCTTCCTCCGCCTCAGCCTGTTGCAGCGCCGCCGACCGACTCAGCTGCTGCTTCTAC GCAGGCCTTGGCGAAGCAGCAGGCTGCTTCTGGAAGCAAGCAGGGAAAGAAGAAATCTGGAGAACTGCACGTGAACGGCGACTGCAGGCCAAACGGTGATGTTCCTAAGAGTCAGAAGAAAGAAGAGAAGG GGGACAAAGGTGCAGGTGGAGATCACAAGAAAGTCAGTGGACGAGCAAAACAGAGCACACCCGGT TCGTCGAAAGGTGGAGCGCCTGGTGCAGACTCCTCGCGCCCCGTAGAGGACGTGACACGTCTCTGCA TGGTTGTGGGTCAGGTGAAGAAAGTCTGGAGACACCCTGAAGCAGACAAGCTGTTCTGCGAAGAAG TCGATATTGGTGAGCCACAGGTGCGCATGATCGCCTCAGGCCTTGTTCCTTACATGAAGGCGGAGGAG CTAGAAGGTCAGAAAGTGATTGTTTTGGCTAACATGAAACCGAAGAATCTCAGAGGATTCCCCTCTCA TGGGATGCTCGTTTGCGCCACAAGCAAGGATCACTCGAAATGTGAATTGATGCGGCCTCCCCCGGAC ACACCGATTGGGGAAAGGCTCACCTTTGAAGGCCTTCAGGGTGAACCTGATCCGGTCATGAACACCA AAGAAGGGAAGTACCCTTTTGCTGCTGTTCAACCGCATTTCTATACTGATGACAATCGCGTCGGAATGTACAAGACTCACAGGTTCATGACAAAACAAGGACCAGTCTTCTGTGACTCTATCGTCGGAGGCACCA TCTCTTAA
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